DB13T 1384.2-2011 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定.pdf

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1、ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.2—2011饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定Determinationofstrain/tetracycline/aureomycininfeed2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.2—2011前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、北京出入境检验检疫技

2、术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、沈磊、米振杰、贾茜、李志平、马春玲、张敬轩、高振同、武英利。IDB13/T1384.2—2011饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定1范围本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定。本标准的方法检出限：50μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用

3、文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqIS03696：1987）3原理试样提取液经离心后，上清液用OasisHLB固相萃取柱和阴离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙腈：色谱纯。4.3盐酸。4.40.4mol/L盐酸溶液：准确量取32.8mL盐酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。4.5草酸。

4、4.60.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。4.7甲酸。4.8甲酸溶液：准确量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可。4.9土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度≥95％。4.10土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、标准物质，分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液贮存在-18℃冰柜中。4.11土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液：根据需要吸取适量土霉素、四环素、金霉

5、素标准储备溶液，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液，基质混合标准工作溶液在4℃保存，可使用三天。4.12OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。1DB13/T1384.2—20115仪器5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.lmg和lmg各一台。5.3旋涡混匀器。5.4固相萃取仪。5.5高速离心机。5.6具塞锥形瓶：50mL。5.7离心管：50mL，5mL。5.8氮吹仪。5.9旋转蒸发

6、器。6试样的制备6.1提取准确称取3.0g样品（准确至0.01g），置于50mL具塞锥形瓶中，加入甲醇10mL，旋涡混匀1min，加入盐酸溶液（4.4）30mL，旋涡混匀1min，超声20min，移至50mL离心管中，5000r/min离心10min，取上清液，待净化。6.2净化取10mL上清液与40mL水稀释混匀，再移入下接OasisHLB柱的贮液器中。溶液以小于1.0mL/min的流速过柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，减压抽干20min。用草酸甲醇溶液（4.6）5mL洗脱，收集洗脱液于40℃减压旋

7、转蒸发至干,用1.0mL流动相溶解残渣，12000r/min离心10min，经0.45μm有机滤膜过滤后，待测。7测定步骤7.1测定7.1.1液相色谱条件色谱柱：InertsilC8，3.5μm，150mm×2.1mm（i.d）或相当者；流动相：乙腈＋甲醇＋0.4％甲酸溶液（18＋4＋78）；流速：0.2mL/mim；柱温：25℃；进样量：20μL。7.1.2质谱条件离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压、碰撞电压等条件优化至最佳值；定性离子对、定量离子对见表1。2DB13

8、/T1384.2—2011表1三种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对土霉素四环素金霉素461/426445/410479/444定性离子对/（m/z）461/443445/154479/154461/381445/428479/462定量离子对/m/z）461/426445/410479/4447.1.3液相色谱-串联质谱测定用土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液分别进样，以峰