实验八 细胞融合-小鼠骨髓瘤SP20细胞与小鼠脾细胞融合.ppt

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1、实验八细胞融合-----小鼠骨髓瘤SP2/0细胞与小鼠脾细胞融合一、实验目的了解细胞融合的原理掌握细胞融合的基本方法细胞融合的概念二、实验原理病毒诱导融合聚乙二醇诱导融合电场诱导融合激光诱导融合常用的诱导融合手段有哪些？二、实验原理细胞融合的概念三、仪器、材料与试剂仪器：离心机、CO2培养箱、超净台、37℃恒温水浴锅、显微镜、血球计数板、解剖器械、烧杯、载玻片、盖玻片、离心管。材料：SP2/0细胞、昆明小鼠试剂：Hanks液、45%PEG，75%乙醇四、实验步骤（1）小鼠摘眼球放血（可不做）,拉颈处死，浸泡在75%酒精内，3～5

2、min（2）无菌取脾脏，Hanks液洗一次，脾脏剪碎，培养液洗一次，过不锈钢筛网，转移至10mL离心管（3）800g离心10分钟，取沉淀细胞用Hanks液洗2次（每次加入5mL溶液，轻轻混匀800g离心10分钟）（4）细胞计数，待用。（5）取对数生长骨髓瘤细胞，800g离心10分钟，取沉淀细胞用Hanks液洗2次（每次加入5mLHanks液，轻轻混匀800g离心10分钟）（6）细胞计数，待用。（7）将骨髓瘤细胞(105-6)与脾细胞(106-7)按1：10比例混合在一起800g离心10分钟，弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚

3、乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。（每组混合两份样品)（8）90s内加入37℃预温的1mL45%PEG（分子量4000）或Hanks液，边加边轻微摇动。37℃水浴90s。（9）加37℃预温的Hanks液8mL以终止PEG作用（10）800g离心10分钟，弃上清，加入1mLHanks液，镜检实验报告1.观察对照组,辨认两种细胞,看两种细胞是否融合。2.观察实验组,找出同种融合细胞和异种融合细胞。3.试说明影响细胞融合的关键因素。