核酸蛋白测定仪使用说明及问题解决.doc

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1、仪器名称：核酸蛋白测定仪使用方向：快速、可靠地检测双链/单链DNA，RNA，寡核苷酸，蛋白质和细菌细胞密度/混浊度型号：Biophotometer生产厂家：Eppendorf添置时间：2006主要性能：•氙灯光源,寿命长达10年,无需预热•可检测吸光度范围：0.000-3.000A•波长范围230nm,260nm,280nm,320nm,562nm,595nm1%±•光度计准确度:1A的误差0.5%±•光度计精确度：1A约为•可测量核酸，蛋白质的紫外测定，lowry,bradford,BAC比色法测定以及OD600•储存和查看最新100个检测结果•自我检测功能•数据可导入到PC机•自动计算浓

2、度和稀释度，可转换浓度单位使用说明：操作说明：准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定，无需预热。一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo）1.例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7/dsDNA”（若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8/ssDNA”；若待测样品为RNA，则按下键“9/RNA”；若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6/Oligo”。）2.将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。（例如用Tris溶液溶解DNA制品，则要用T

3、ris液做空白对照。）3.按下键“Blank”；4.仪器记录空白对照，设置为0.000A；5.将第一个样品置入样品孔；6.按下“Sample”；7.仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；8.直接放入第二个样品；9.按下“Sample”；10.仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；11.依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./Function”（2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。设定样品的稀释度（1）按下键“Diluti

4、on”；（2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。二、蛋白质浓度的直接测定（280nm测定）1.按下键“4/Protein”；2.将空白对照置入样品孔；3.按下键“Blank”；4.仪器记录空白对照，设置为0.000A；5.将第一个样品置入样品孔；6.按下“Sample”；7.仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；8.依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，可查看测定结果。三、蛋白质浓度显色法的间接测定（Bradford，Lowry，BCA）1.按下键“1/Bradbord”or“2/Lowry”or“BCA”选择蛋白质显色反应的方法；注：Bradfor

5、d键按两次，每次显示不同的测定范围。2.设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围。按下键“Parameter”用上下键进行选择和参数调整。3.将空白对照置入样品孔；4.按下键“Blank”；5.仪器记录空白对照，设置为0.000A；6.将第一个标准品或样品（如需沿用已存储的标准曲线，可直接测样品）置入样品孔；7.按下“Sample”或“Standard”；8.依次测定标准品或样品，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。四、OD600细菌生长密度测定1.按下键“5/OD600”；2.将空白对照置入样品孔；3.按下键“Blank”；4.仪器记录空白对照，设置为0.000A；5.

6、将第一个样品置入样品孔；6.按下“Sample”；7.仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值；8.依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。注意事项：1为了尽量减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1－1.5A。在此范围内颗粒的干扰相对较小，结果稳定。样品的浓度不能过低或者过高。2混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；3混合液中不能有气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；4必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则测定浓度结果差异太大；5换算系数和样品浓度单位选择要一致；6不能采用窗口磨损的比色杯；7样品的体积必须达到比色杯要求的最小

7、体积（50ul）；8通常浓度的样品可以用10mm光程长度进行检测。对于高浓度的样品，只需将比色皿旋转90°，使用稍短的2mm光径进行检测。重要的比值表示样品的纯度：1A260/A280，用于评估样品的纯度。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。2A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260