溶藻细菌DH-e代谢产物对东海原甲藻的抑制作用.pdf

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1、第36卷第2期2017年5月应用海洋学学报JOurnalofAppI

2、edOceanography溶藻细菌DH—e代谢产物对东海原甲藻的抑制作用韩光耀，谢丽玲，毕潇，吴培枫，周亮，朱炎坤(汕头大学理学院生物系，广东汕头515063)摘要：从浙江沿海地区赤潮多发区分离获得一株对东海原甲藻(Proroc叭￡rum幽嘞oie瑚e)具有高效溶藻作用的细菌DH-e，研究该菌的溶藻作用方式和对东海原甲藻的生理功能与细胞结构的影响．结果发现其溶藻作用方式为间接溶藻，溶藻效应呈现出作用浓度和时间依赖性，作用浓度0．5％～2．0％，时间为32h时，溶藻率均达80％以上，具有短期高效的溶藻效应；溶藻活性

3、物质分子量小于2kDa，具有耐低高温、强酸碱的特性；代谢产物对叶绿素。造成严重的破坏和分解，并改变胞内总糖含量，影响生理代谢活性；sEM与AO／EB双染检测发现溶藻活性物质能够破坏藻细胞膜完整性，显著改变藻细胞内部结构，造成内容物大量释放．关键词：海洋生物学；溶藻细菌；东海原甲藻；溶藻作用；赤潮DOI：10．3969／J．ISSN．20954972．2017．02．001中图分类号：P735文献标识码：A文章编号：20954972(2017)01—0151-07赤潮已成为全球海域面临的重大灾害之一．赤潮的发生，对海洋的正常生态结构、海洋渔业以及水产资源都有破坏作用¨。2J，给人类健康

4、带来极大的危害。3圳．近几年有害赤潮在我国频繁发生，根据2006～2015年的中国海洋环境质量公报"o公布的数据显示，东海海域赤潮发生频率连续10a居于我国四大海域之首．东海原甲藻(Proroc帆帆m如粥一矗oi肌se)是发生在该海域的原甲藻赤潮的主要原因藻之一，在长江口附近、浙江近海以及福建沿岸海域经常性引发大规模赤潮拍。，因此如何有效防治赤潮关键性甲藻成为赤潮防治的重中之重．溶藻细菌被发现以来一直得到学术界的广泛关注，其可以通过直接或者问接的作用专一性地抑制藻类的生长甚至裂解藻细胞"‘1⋯．溶藻细菌大多分离于发生赤潮的海域，如东海作为我国赤潮多发海域具有丰富的溶藻菌资源．目前已报

5、道的溶藻细菌主要属于假交替单胞菌属(Rendoo眈r0啪n邮)、交替单胞菌属(4f御一omonos)、噬纤维菌属(C弘op^o即)、腐螺旋菌属(s。一pr0印im)、黄杆菌属(Ffo∞6nc灯iMm)、弧菌属(W捌一o)、希瓦氏菌属(5^删。几eff0)、芽孢杆菌属(Bnc江fw)、PfⅡ加m：cr06i“m属和微球菌属(施crococcu5)等。¨。12：．同时，研究发现溶藻菌对宿主藻细胞作用方式主要有5种：直接接触溶藻、释放杀藻物质、细菌与藻竞争营养物、形成菌胶膜及进入藻细胞内杀灭藻细胞H3I．利用海洋细菌的溶藻作用防治赤潮，可以避免物理法与化学法治理赤潮带来二次污染的缺陷，是保

6、持海洋环境生态平衡的可靠方法之一．本课题组从中国东海浙江沿海地区赤潮多发区分离获得一株对东海原甲藻具有高效溶藻作用的细菌DH-e’属问接溶藻细菌．探讨了溶藻菌代谢产物对东海原甲藻生理功能与细胞结构的影响，并对溶藻活性物质特性进行了初步分析，以期为东海赤潮微生物防治研究提供一定的理论依据及应用价值．1材料与方法1．1材料1．1．1菌种溶藻细菌DH—e由本课题组分离于浙江沿海地区赤潮多发区，通过生理生化及16SrD—NA测序分析鉴定该菌株属于盐单胞菌属(厶『0fo，∞n05)，16SrDNA序列长度为1444bp(Gen—Bank登录号为KPl44872)．溶藻菌DH—e接种于LB海水培

7、养基(10．0g蛋白胨，5．0g酵母浸膏，1000收稿日期：2016．05-30基金项目：国家自然科学基金重点资助项目(41230961)；广东大学生科技创新培育专项资金资助项目(pcq}12016b叭93)；汕头大学校内科研基金资助项目(NFcl4003)作者简介：韩光耀(1990～)，男，硕士研究生；E-nlail：hg，062l@163com通讯作者：谢丽玲(1964～)，女，副教授；E-mail：llxie@stu．edu．cn应用海洋学学报36卷cm3海水)，160r／mjn，28℃恒温振荡培养．1．1．2藻种实验选取的藻种由暨南大学生命科学技术学院提供，接种于f／2培养液

8、中，置于光照培养箱中培养，温度为20±1℃，光照强度为4000lx，光暗比为12h：12h．1。2实验方法1．2．1无菌滤液溶藻实验将所获得的菌株分别接种到液体LB培养基中，28℃下培养5d，使培养基中的营养成分消耗殆尽，并大量的分泌代谢物．将菌液于4000r／min离心15min收集上清，o．22斗m滤膜过滤多次，得到无菌滤液，划平板确定无菌．取0．00、O．25、0．50、1．00、1．50、2．00cm’无菌滤液加入到100cm3东海原甲藻(1．0×