海湾扇贝组织蛋白酶L基因编码区的克隆和分析.pdf

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1、第30卷第3期2011年06月海洋通报MARINESCIENCEBULLETINVoi．30，No．3Jun．20ll海湾扇贝组织蛋白酶L基因编码区的克隆和分析李娟1’2，李莉1，张国范1(1．中国科学院海洋研究所，山东青岛266071；2．中国科学院研究生院，北京100049)摘要：通过eDNA末端伙速扩增技术(RACE)，从海湾扇1贝(Argopectenirradians)中克隆得到了组织蛋白酶L基因(AiCL)的编码区全长，为1095bp。推测编码364个氨基酸。经比对与分析发现蛋白序列中存在4个组织蛋白酶L活性位点保守氨基酸

2、：Q164，C170，H309，N329；6个极为保守的半胱氰酸残基：C167，c201，C210，C243，C302，C351。预测其N端17个氨基酸为信号肽序列，c端AsY盯V可能也是分泌信号。AiCL成熟蛋白分子由219个氰荩酸构成，前体肽的切割位点预计在A145和M146之闻。序列同源性分析中，AiCL蛋臼序列与软体动物同源蛋白最为相似，序列·致性在50％以卜，在系统进化树中与其它无脊椎动物组织蛋白酶L聚合到一起。通过SWISS．MODEL构建的AiCL成熟蛋白二三维模型表明该蛋白审问结构商度保守。根据其序列特征，推测AiCL

3、可能具有水解多种肌蛋白的活性。关键词：海湾扇贝；组织蛋白酶L基因；克隆；序列分析中图分类号：$917文献标识码：A文章编号：1001—6932(2011)03．0338-06CloningandsequenceanalysisofcathepsinLgenefrombayscallopArgopectenirradiansLIJuanl，一，LILil，ZHANGGuo-fanl(1．InstituteofOceanology,CllineseAcademyofSciences，Qingda0266071，China；2．Gradua

4、teUniversityofChineseAcademyofSciences，B两hag100049，China)Abstract：1kcompleteopenreadingframe(ORF)ofcathepsinLwasobtainedfrombayseaUop(Argopectenirradians)byRACEtechnique．The0RFwasofl095bp，encoding364aminoacids．Fourconservedresiduesforenzymeactivity(Q164，C170，H309，N329)a

5、ndsixpreservedcysteineswerefoundintheproteinsequence．17aminoacidsofNterminalwerepredictedtobethesignalpeptideandthesequenceASYPTVatCterminalwasfoundtobeapossiblesignalsequence．ThematureproteinofAICLcontainod219aminoaci出andthepotentialcleavagesitewasbetweenA145andM146．An

6、alysisindicatedAiCLsharedthehighestidentities(>50％)withmolluscancathepsinLs．ItclusteredwithotherinvertebratecathepsinLsinthephylogenetictree．The3D—modelpredictedbySWISS．MODELdemonstratedthatcathepsinLwasconservedintertiarystructure．Collectively．datashowedthatAiCLwaslike

7、lytocatalyzethehydrolysisofmultiplemusclerelatedproteins．Keywords：BayscallopfArgopectenirradians)；CathepsinLgene；cloning；sequenceanalysis组织蛋白酶(cathepsin)是一类主要存在于溶酶体的蛋白水解酶，与核糖核酸酶、B一葡萄糖醛酸酶、乙酰基转移酶以及其他的蛋白酶一起参与溶酶体介导的蛋白质的消化及转化过程⋯。“组织蛋白酶”一词1920年被首次使用，它们几乎存在于所有生物，包括病毒、细菌、植物、动物。

8、这一酶家族包括半胱氨酸蛋白酶(L型等)、丝氨酸蛋白酶(A型、G型等)以及天冬氨酸蚩白酶(D型、E型等)口I。研究发现组织蛋白酶L(cathepsinL)能够水解多种蛋白质，包括肌球蛋白、肌动蛋白、细胞溶质蛋白、胶原及弹力