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《A群猪轮状病毒JS株vp7基因序列分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第中国预防兽医学报,卷第期年月群猪轮状病毒株基因序列分析’,,’,’,’,,’,白’,’,”高秀春时洪艳体有恩吴波平孙东波兴华陈建飞冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨东北农业大学生命科学院黑龙江哈尔滨摘要根据已发表的猪轮状病毒毒株回基因核普酸序列两端保守区序列,设计一时特异引物,以猪轮状病毒毒株反转录为模板,通过方法扩增出长约目的片段。将其进行一克隆、。结果表明,,含有,编码个氮基酸序列测定和分析叨基因全长一个的开放阅读框与,同源性分别为和已知的巧个毒株甲全长基因的核普酸及推导的氛基酸序列比较,核普酸系统发育进化树结果表明,毒株
2、与轮状病毒型参考毒株、一亲缘关系较近,分为,。目,。一个群表明毒株血清型为型前我国尚未见猪及其它动物轮状病毒型流行株的报道关健词猪轮状病毒咖基因序列分析一一一中图分类号文献标识码文章编号一,,雌一,一,一,一,一,一龟,’,加,,,,,,盯甲代饰一一甲,甲一一叮娜甲轮状病毒,属于呼肠孤病毒科基因组由个不连续双链片段组成,总长度轮状病毒属,是各种幼龄。目前已鉴定出种蛋白,分别由个基因片。,、。动物发生腹泻的主要病原之一川粒子略呈圆段编码分属于内衣外衣壳蛋白和非结构蛋白,,,。,、形无囊膜具双层衣壳直径为一中病毒粒子表面有种抗原即群抗原中央为一电子致密的六角型核心,直径一。和抗原及血凝
3、素抗原。根据群抗原的差异收稿时一一间作者简介高秀春,女,辽宁朝阳人,硕士研究生,主要从事动物病原微生物的研究通讯作者一少中国预防兽医学报年,及病毒末端指纹图分析可将其分为个群细胞培养传。至代毒用于本研究。群是最早发现具有共同群抗原的典型一试剂’购自轮状病毒,其它为非典型轮状病毒,其中可感染猪购自天为时代、、,。的有和共个群但以群为主购自、形,、一钟是的外衣壳蛋白也是一种糖基化蛋曲和载体购自宝生物工程,,,。白由个组成因不同毒株而异分别大连有限公司由或、基因编码,为病毒外膜主要中和抗原,基叨因的扩增决定病毒的血清型,与病毒的毒力及免疫保护性引物根据发表的毒株,。,相关也是划分血清型的
4、主要标志疫苗的研究证甲基因组序列盯两端保守区设计一对用于扩,。,,明不同血清型之间的交叉保护作用甚微因此增叫基因引物序列如下叨’,基因及其编码的蛋白一直是轮状病毒研究中的一,,一甲,,,一。热点同时钾也是一种钙调蛋白与病毒粒子’由上海生物工程技术有限。。形态形成和稳定性有关公司合成,,一,目前对的研究比较多但由于其空间构按常规方法提取病毒完,,,,。象性复杂排列规律不是很明显因此对于疫苗成逆转录程序进行扩增反应,,℃变性、的研制带来较多困难在很大程度上阻碍了的参数预变性,退。、、,预防和治疗本研究对猪轮状病毒毒株蛋火一延伸个循环,延伸白基因进行扩增、序列测定,并对测定结果进,保存。
5、扩增产物电泳取产行分析,借以了解毒株咖基因的分子特性以及物琼脂糖凝胶电泳,紫外光下分析目的片段。蛋白的功能,为进一步开展疫苗、诊断预产物克隆及鉴定产物克隆到。一,。防等研究奠定生物学基础载体具体操作程序见参考文献进行、酶切鉴定,筛选阳性重组质粒送上海生物工。材料和方法程有限公司进行序列测定甲基因序列的同源性比较用病毒猪轮状病毒从江苏分离获得,简称软件方法对其中株咖全基,,。株由南京农业大学张海彬教授惠赠病毒经因序列进行同源性比较并绘制基因系统发育进化树裹同源序列比较所采用的参考毒株序列来源随山奴此曲即口毒株登陆号分离年代分离国家爪型毒株登陆号分离年代分离国家爪型扭如一朗一一旧一沁翻
6、一尹一一沁了一一一沁即朋一一沁翻一一一沁邵七一一一一一一一七叉李,一“,一侧一一【劝一一一创峨七“一”。备注代表未知“一”,第,等群猪轮状病毒株甲基因序列分析期高秀春结果甲基因的一扩增结果以株反转录为模板,进行扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可见左右特异的目的条带,大小与预期结果一致图。图甲甚因产物凝胶电泳分析结果‘,冲尚详叮肪石甲泊‘,重组质杜鉴叻定结果取重组质粒进行、酶切鉴定,均为,与预期结果相符。阳性叨基因的核替酸序列浏定以及与其它毒株的同源性分析对重组质粒进行序列测定,经比较分析证明获得了蛋白的全长基因,共,包括夕端非编码区,,端非编码区,中间为一个完整的,编码个氨基酸。有
7、两个起始密码子,分别为一、一处的,前者为一弱起始序列,后者为一强起始序列,。终止密码子为选取上具有代表性毒株的猪,。,全基因序列进行同源性比较结果显示毒株与其它毒株核昔酸的同源性在,一之间其中与同源性最高为,与一同源性。最低为氨基酸同源性在之间,但与毒株氨基酸同源性最高为,与科一毒株同源性最低为,与各毒株氨基酸的同源性整体高于核昔酸的同源性表,氨。基酸突变主要发生在高变区图在氨基酸系统发育进化树中,根据氨基酸序列进化关系可以划分为个群图,毒讨论、一,株与属于群一毒株为
