寄生虫样本的采集、制作及保存》.ppt

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1、寄生虫样本的采集、制作及保存深圳市疾病预防控制中心二O一O年十一月寄生虫样本的概念：指用于标本制作、保种、冷藏的寄生虫不同生活史阶段的虫体材料、遗传材料及相关的生物材料，是寄生虫种质资源的实物资源。一、寄生虫样本的采集：掌握基本知识：了解人体寄生虫的形态、生活史和生态以及地域分布等有关知识。1、样本来源：2、采集时注意事项：1、样本来源：肠道、腔道内的蠕虫卵、原虫滋养体或包囊：排泄物、分泌物肠道内的蠕虫成虫：药物驱出血液、骨髓内的寄生虫：抽取血液和骨髓穿刺肝、肺、肌肉等组织内的寄生虫：穿刺、活检组织作切片有些难以采到的寄生

2、虫：动物接种及人工培养增殖2、采集时注意事项：①详细的样本记录：②保持样本的完整：③防止自身感染：二、寄生虫样本的制作和保存：1、尽快适当处理：2、固定方法：3、常见的固定液：4、固定后的处理保存：5、特殊用途的样本处理：1、尽快适当处理：①进行人工饲养。②及时感染动物进行保种。③需制作玻片标本时，先用0.85%生理盐水将虫体粘附的污物洗净，固定后制作玻片标本。④如条件所限不能对样本及时处理，应立即将样本放入4℃冰箱内，但时间不能过久，以免虫体腐烂。2、固定方法：固定处理使虫体在短时间内迅速死亡，保持虫体标本原有的姿态，并

3、使虫体内的物质(如蛋白质、脂肪和糖类等)凝固，防止腐烂和自溶，保证虫体内部结构完整并易于着色。无论是新鲜虫体还是病变组织，固定越及时越好。常用的固定方法有物理固定与化学固定两种。物理固定：以加热和干燥方法固定标本。化学固定：用某些化学药品配成溶液来固定标本，这些溶液叫做固定液。固定时将标本浸于固定液内。3、常见的固定液：常用于配制固定液的试剂有甲醛、乙醇、升汞、苦味酸、冰醋酸等。固定液分为单纯固定液与复合固定液两种。单纯固定液配制简单，使用方便，但均不能兼备各种试剂的优点，因此较少应用。复合固定液由两种以上化学药品配制而成

4、，可利用各种药品的优点以互补不足，例如醋酸会使细胞膨胀，而乙醇与苦味酸反使细胞收缩，两者混合使用，可使收缩和膨胀作用抵消。单纯固定液：甲醛：具有较强的杀菌效果，能保存标本免于腐烂。由于其渗透力较强，有硬化标本的性能，故准备切片的活检组织多用此固定液保存。乙醇：为无色液体,具有固定、保存和硬化标本的性能，渗透力强，其主要缺点在于吸收水分，能使标本收缩。由于乙醇可使虫体或组织收缩，表面硬化，因而较难渗入到组织深部，所以不宜固定大块组织。乙醇除了固定和保存虫体以外，还在制片过程中用于脱水。复合固定液：鲍恩氏(Bouin)固定液：

5、含苦味酸饱和水溶液75份,甲醛25份,冰醋酸5份。固定时间3~12h，或过夜。临用时配制，不宜久藏。该固定液适用于一般小型蠕虫的固定。劳氏(Looss)固定液：含升汞饱和水溶液100ml，醋酸2ml。适用于固定小型吸虫，固定4~24h。肖氏(Schaudinn)固定液：含升汞饱和水溶液2份，95%乙醇1份，每100ml混合液中加入冰醋酸5~10ml。适用于固定肠原虫涂片，固定10~60min。布莱氏(Bless)固定液：含70%乙醇90ml、40%甲醛7ml、冰醋酸3ml。此固定液渗透力强，为昆虫幼虫的良好固定剂，亦可固定

6、小型吸虫和绦虫。4、固定后的处理保存：样本经固定后，视样本的种类、大小以及固定液的种类不同，后处理的方法也不尽相同。用任何保存液(如5%甲醛液或70%乙醇)固定后的虫体，须在1周内重新更换于新的保存液内保存，换液的目的是防止药液被稀释而影响保存虫体的效果。一般固定的标本应保存于紧塞的瓶中，并注明标本的来源、名称、保存液、日期和采集人姓名，存放于阴暗处备用。5、特殊用途的样本处理：样本准备开展分子生物学研究，如提取DNA等，需对样本进行特殊处理。将现场采集的蠕虫(活虫)成虫、幼虫或虫卵,可选用以下固定方法进行保存：①固定于2

7、0%二甲基亚砜(DMSO)饱和盐水溶液中存放4℃保存；②直接固定于100%无水乙醇；③可将活虫体直接保存于-70℃冰箱中。含虫体的粪便标本：现场采集的粪便(内含虫卵、幼虫或原虫时)可选用：①如短期保存,可直接保存于4℃冰箱或-70℃干冰中；②如长期保存，可将粪便与无水乙醇1∶1混合后4℃保存或与重铬酸钾1∶1混合后4℃保存。含虫体的血液标本：现场采集的血液标本(如内含原虫,未服用过药物)，可以1~5ml血液中加EDTA4℃保存，也可将5~6滴血采集在滤纸上，待干后可短期保存于4℃冰箱内。三、常见寄生虫样本的采集、固定与保存

8、：1、蠕虫样本：1—①蠕虫成虫1—②蠕虫虫卵2、原虫样本：2—①肠道内原虫2—②腔道内原虫2—③组织内原虫2—④血清内原虫3、医学昆虫样本：1—①蠕虫成虫样本：采集：可用驱虫药物自宿主的消化道驱出虫体，或解剖自然感染和人工接种感染的动物及尸体解剖而获得虫体。清洗：采集到的虫体须将其体表附着物除去：放入0