工业微生物学实验多媒体课件(十个实验).ppt

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1、微生物学实验实验一培养基的制备和灭菌一、目的要求学习和掌握各种培养基的制备方法，其中包括培养基的配制，包扎及灭菌技术。二、基本原理培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体培养基和半固体培养基。

2、按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。培养基配制后还必须进行灭菌。灭菌和消毒是二个不同含义的名词。消毒是指消灭病原菌或有害微生物，而灭菌则是杀死或消灭一定环境中的所有微生物。消毒与灭菌的方法很多，但总的可分为物理法与化学法两大类。物理法包括加热灭菌（干热灭菌与湿热灭菌），过滤灭菌、紫外线灭菌等。化学方法主要是利用有机或无机的化学药品对实验室用具和其它物体表面进行灭菌与消毒。三、实验材料每组同学需要准备以下材料（2人/组）：小试管：12支（15*150mm）培养皿：12套（ф9cm）吸管：3支（

3、1ml）三角玻扒：2支烧杯：1套（50ml，100ml，250ml，500ml）量筒：1个（100ml）玻棒：1支分液漏斗：1套药匙：2把剪刀：1把铁丝：数支标签贴纸：1张铅笔：1支10ML玻璃吸管：1支四、实验内容（一）、培养基的配制：同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。操作图示：培养基配方：四、实验内容肉汤培养基：营养肉汁1g自来水50mlPH7.2麦芽汁培养基：麦芽汁5g自来水50ml自然PH固体培养基

4、：由液体培养基加2％琼脂1．配制肉汤斜面培养基50mL将小烧杯置天平上，用药匙取营养肉汤干燥培养基，称取1g先加少量自来水，溶解彻底再转移到量筒，定容至50ml，然后倒在250mL烧杯里，加入琼脂1g（2%），浸泡于液体培养基里，液面位置做好标记，在电炉上加热融化后（注意补充蒸发的水分以保持原体积不变），用分液漏斗分装6支小试管，每支5mL左右（约试管高度的1/5左右），用硅胶塞塞好试管口，再用防潮纸和棉绳将试管塞罩住扎成一捆。图4-10用漏斗分装培养基及摆斜面2．配制麦芽汁斜面培养基（方法同上）四、实验内

5、容3．注意事项：本实验使用调配好的“干燥培养基”，这种培养基是将新鲜配制的液体培养基用喷雾干燥法，真空干燥法，低温干燥法或蒸发干燥法等将培养基内所含的水分去掉；或将培养基内的各种固形成分，经适当处理，充分混匀，便成干燥粉末而成。使用时只要按比例加入一定量的水，经溶解，无需调pH，分装，高压蒸汽灭菌，即可使用。“干燥培养基”成品很容易吸潮，在称量时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再取另一种药品。瓶盖也不要盖错。在烧杯融化琼脂的过程中，人要在电炉旁看着

6、，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。注意带上棉纱手套防止烫伤。分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。四、实验内容（二）培养基灭菌培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-1

7、21℃，15-20分钟，干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。    在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。四、实验内容（三）包扎1．培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。2．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气

8、时棉花会下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。3．三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端，与报纸约呈45º角，并将右端多余的报纸打一小结。四、实验内容五、实验报告思考题：培养基应具备哪些条件?在培养基配制操作过程中应注意什么问题?为什么?培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?高压蒸汽灭菌的关键为什么是高