乙肝表面抗原测定.ppt

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1、乙肝表面抗原测定组员:王安娜、李婷玉、罗梦娇、翁博文综述乙型肝炎病毒：机体感染HBV后血清中首先出现的标志物，可作为乙肝的早期诊断和普查HBsAg无传染源性而有免疫原性，可刺激机体产生抗-HBs通过血液检测是唯一检测是否感染乙肝病毒的唯一途径乙肝病毒是通过血液传播，主要通过母婴，血液和性传播。日常生活和工作接触不会传播乙肝病毒。如果HBsAg、HBeAg和抗HBc三项阳性（即为大三阳），其血液就有高度传染性凝集反应2.间接凝集反应：反向间接凝集基本原理：将抗体致敏的红细胞与样本中相应抗原作血凝试验，观察红细胞凝集现象，用以判断样本中相应

2、抗原的有无及其效价。凝集反应3.协同凝集反应基本原理：以金黄色葡萄球菌为载体；将特特异性抗体先结合至金黄色葡萄球菌表面；其Fab段游离与菌体表面，遇到相应抗原时与之结合；即可导致金黄色葡萄球菌凝集成块，称为协同凝集试验。凝集反应沉淀反应沉淀反应可溶性抗原（如细菌浸出液、细胞裂解上清液及血清蛋白等）与相应抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。参与沉淀反应的抗原称为：沉淀原参与沉淀反应的抗体称为：沉淀素沉淀反应凝胶沉淀试验单向琼脂扩散试验：抗原或抗体这两种成分中只有一种扩散，将已知抗体与琼脂混合，将抗原置

3、于凝胶孔中，抗原则呈辐射状扩散，在孔的周围与抗体结合，在比例合适的地方形成肉眼可见的沉淀环。当抗体的浓度一定时，抗原的浓度与形成沉淀环的直径成正比。双向琼脂扩散试验：双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。沉淀反应免疫电泳技术对流免疫电泳：双向琼脂扩散试验+电泳火箭免疫电泳：单向琼脂扩散试验+电泳免疫电泳：双向琼脂扩散试验+区带电泳沉淀反应酶标记免疫测定技术酶联免

4、疫吸附剂测定法简称酶联免疫法，或者ELISA法。是固相酶免仪测定中最具代表性的一种既可检测抗原又可检测抗体3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物双抗体夹心法酶联免疫吸附剂测定法基本原理：将已知抗体包被到固相载体上，使待测标本中的相应抗原与抗体结合，然后再与酶标抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗去多余未结和成分，加底物后的显色，根据显色反应的强度确定待检抗原的含量。2.双位点一步法基本原理：在双抗体夹心法基础上使用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。测定时将待检

5、标本和酶标抗体同时加入进行反应，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤后，即可加入底物，显色后进行抗原的定性或定量测定。酶联免疫吸附剂测定法3.竞争法基本原理：酶标抗原和待检抗原对固相抗体具有相同的结合力，在同一反应体系中两者竞争结合固相抗体。若将固相抗体和酶标抗原固定限量，且前者的结合位点少于酶标和非酶标抗原的分子数量和，免疫反应后，结合与固相酶标抗原量与标本中待检抗原含量成反比。酶联免疫吸附剂测定法荧光免疫分析技术荧光免疫显微技术用荧光素标记抗体；与特异性抗原作用；除去游离的荧光抗体，借助显微镜观察；检测固定组织上的相遇抗原或者血清中

6、的相应抗体。1.直接法基本原理：将特异性荧光抗体直接滴加于待检抗原标本上，直接与相应抗原反应，检测未知抗原。荧光免疫显微技术2.间接法基本原理：用荧光素标记抗球蛋白抗体，鉴定未知抗原或未知抗体；先是未标记抗体（一抗）与标本中的抗原反应；再用已标记的二抗与一抗反应；通过观察荧光现象，从而达到检测未知抗原或抗体的目的。荧光免疫显微技术3.补体结合法基本原理：利用补体结合反应的原理，用荧光素标记抗补体的抗体，测定未知抗原或抗体先是标本中的抗原与抗体反应形成抗原-抗体复合物后，加入补体与之结合。再加上抗补体的荧光素标记抗体，通过荧光现象检测抗原

7、或抗体荧光免疫显微技术放射免疫技术放射免疫基本原理：标记抗原（Ag*）和非标记抗原（Ag）对特异性抗体（Ab）的竞争结合反应免疫放射基本原理：以过量的放射性核素标记抗体与待测抗原进行的非竞争性结合反应；待充分反应后，除去游离的标记抗体；Ag-Ab*复合物的放射性强度与待测抗原呈正比关系。免疫放射技术类型1、单位点IRMA过量标记抗体与待测抗原反应，形成抗原-标记抗体复合体反应平衡后分离剩余的标记抗体测定上清液的放射量（放射强度与待测抗原的量呈正比关系）2、双位点IRMA（双抗原夹心法）固相抗体与待测抗原结合，形成固相抗体-待测抗原-标记

8、抗体复合物分离游离的标记抗体，测定固相上的放射性强度金标记免疫技术斑点免疫金层析试验免疫金测试区：特异抗体参照区：抗免疫金抗体发光免疫技术化学发光酶免疫测定基本原理用参与催化某一化学发光反应的酶来标记抗原或