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1、5黑龙江畜牧兽医6科技版动物保健品2009年8月(上)99禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制1211111金天明,谷禹,马文芝,周淑云,李富桂,郭亮,张建斌(1.天津农学院天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384;2.天津市北辰区畜牧水产局,天津300400)中图分类号:S852.5文献标识码:B文章编号:1004-7034(2009)08-0099-02关键词:禽霍乱;大肠杆菌病;克雷伯菌病;蜂胶;三联灭活疫苗摘要:利用禽巴氏杆菌C48-1、C48-2强毒株、禽大肠杆菌O78和O1血清型强毒株及克雷
2、伯菌临床分离株制苗,通过疫苗对鸡的免疫效力试验、疫苗最小免疫剂量试验、疫苗产生坚强免疫力时间的测定、疫苗免疫期的测定和疫苗保存期的测定等,研制出禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗。结果该三联灭活疫苗安全可靠,免疫原性良好,最小免疫剂量为0.5mL/只,免疫7d后产生坚强保护力,疫苗对上述疾病的保护率为100%,免疫期为6个月,4e条件下保存期为9个月。禽霍乱是由Fo型禽多杀性巴氏杆菌感染引起的1.1.3试验用鸡60日龄健康鸡,隔离条件下饲疾病,急性病例的特征是在黏膜和各器官上有出血养,经检测禽多杀性巴氏杆菌抗体、鸡
3、大肠杆菌抗体点,慢性病例在肝脏上可发现局部坏死区。该病的发和鸡克雷伯菌抗体均为阴性。病率和死亡率很高,常给养禽业造成严重的经济损1.1.4效力攻毒用的强毒株在攻毒前用制苗菌株失。鸡大肠杆菌病是由某些致病性血清型大肠杆菌通过鸡体进行增强试验,巴氏杆菌攻毒量为引起的一类疾病的总称,是严重危害养鸡业发展的细0.2mL/只,大肠杆菌为0.5mL/只,克雷伯菌为菌性传染病之一。克雷伯菌又称费里兰德杆菌,广泛0.5mL/只。存在于自然界中,长期以来人们都认为它只是一种条1.2方法件致病菌,对畜禽危害不大,一直未引起重视,近年来1.2.1制苗鸡
4、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌和克雷该菌引起的感染日益增多。伯菌灭活菌液按5兽用生物制品规程6中的方法制目前,对上述疾病的防治国内多以药物为主。由备。于上述细菌极易产生耐药性,临床疗效不理想。笔者1.2.2配苗分别取5份鸡多杀性巴氏杆菌、大肠在已有研究的基础上,研制了禽霍乱、大肠杆菌病和杆菌和克雷伯菌灭活菌液(含菌量分别为3.0@91010克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗,现将结果报道如10个/mL、2@10个/mL和1.8@10个/mL),分别下。加1份灭菌氢氧化铝胶,充分混匀后静置沉淀2~1材料与方法4d,弃部分上清液,分别浓缩至全量
5、的3/4,取样进1.1材料行无菌检验;将无菌检验合格的浓缩菌液按3B1B1的101.1.1毒种选择鸡多杀性巴氏杆菌C48-1和比例混合,调整菌液浓度在1.5@10CFU/mL以上;C48-2强毒株,由天津农学院基础兽医学实验室提上述浓缩灭活菌液按混合后总量的0.005%加入硫供;鸡致病性大肠杆菌O78和O1血清型强毒株,购自柳汞,充分混匀。中国兽药监察所;鸡克雷伯菌,临床分离株。1.2.3疫苗检验物理性状、无菌检验、安全性检验1.1.2培养基马丁肉汤、含0.1%裂解红细胞全等均按5兽用生物制品规程6中的方法进行。血和4%健康动物血
6、清的改良马丁琼脂平板、麦康凯1.2.4疫苗对鸡的免疫效力试验将试验鸡分成琼脂平板,购自天津市生化试剂有限公司。5组(三联疫苗组、禽巴氏杆菌单苗组、大肠杆菌单苗组、克雷伯菌蜂胶疫苗组和生理盐水对照组),前4组收稿日期:2008-07-07;修回日期:2009-04-23基金项目:天津市高等学校科技发展基金计划项目(20060720);每组10只鸡,生理盐水对照组5只鸡,免疫剂量为天津农学院科学研究发展基金计划重点项目(2006001)0.5mL/只,免疫后14天连同生理盐水对照组用致作者简介:金天明(1968-),男,副教授,博士.
7、死量禽霍乱、大肠杆菌和发病量克雷伯菌混合菌液攻HeilongjiangAnimalScience100动物保健品andVeterinaryMedicinel82009毒,测定免疫效力,攻毒后连续观察14d,记录各组死表2三联疫苗最小免疫剂量试验结果亡和发病情况。巴氏杆菌攻毒结果大肠杆菌攻毒结果克雷伯菌攻毒结果1.2.5三联疫苗最小免疫剂量试验将试验鸡随机项目免疫鸡数/只保护数保护率保护数保护率保护数保护率分成3组,2个试验组每组10只鸡,生理盐水对照组/攻毒数/%/攻毒数/%/攻毒数/%-10.5mL#只组1010/1010010
8、/1010010/1010015只,试验组免疫剂量分别为0.5mL/只和-11.0mL#只组1010/1010010/1010010/101001.0mL/只,生理盐水对照组注射的生理盐水剂量为生理盐水对照组15(分3个处理组)0/500/500/
