流式细胞仪检测HLA-B27及其临床意义.doc

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1、流式细胞仪检测HLA-B27及其临床意义　　摘要：目的通过流式细胞术对人体外周血HLA-B27的检测，来评价HLA-B27辅助临床诊断强直性脊柱炎（AS）的应用价值。方法56例强直性脊柱炎患者和51例健康体检者，用荧光标记的抗HLA-B27/CD3单克隆抗体与其外周血（以EDTA-K2抗凝）特异性结合,用流式细胞仪检测其荧光强度来反映细胞表面HLA-B27抗原的表达。结果从流式细胞术检测显示，56例AS患者中，HLA-B27阳性51例，阳性率为91.1%；51例健康体检者中，HLA-B27阳性3例，阳性率为5.9%。两者存在显著性差异，P<0.01。结论

2、AS患者HLA-B27阳性率明显高于正常人，所以检测HLA-B27对强直性脊柱炎的诊断与鉴别诊断有着重要的意义。　　关键词：流式细胞仪；强直性脊柱炎；HLA-B27B27是HLA-B27位点上的一个重要的等位基因，其与许多疾病具有相关性，尤其是强直性脊柱炎；而且这种相关是迄今为止已知的HLA与疾病的关联中最强和最典型的。目前，检测HLA-B27的主要方法有补体依赖性微量淋巴细胞毒试验、玫瑰花法、ELISA法、流式细胞术、PCR法等。其中以标准的NIH微量细胞毒法最为常用，这种方法操作简便且准确性尚可，但是受细胞纯度、补体差异、单抗效价及HLA高度多态性的

3、影响，易出现漏诊或假阳性(错判、误判)[1]。现在我们用荧光标记的单克隆抗体与人类白细胞表面抗原HLA-B27结合，用流式细胞仪来检测其细胞表面的HLA-B27表达，现报告如下：　　1资料与方法　　1.1一般资料　　1.1.1标本来源107例该院骨科门诊及住院确诊为AS的患者和健康体检者。其中经临床检查和影像学检查符合AS的患者56例，男38例，女18例，年龄18~77岁。健康体检者51例，男27例，女24例，年龄23~82岁。取上述人员静脉血2ml，EDTA-K2抗凝。　　1.1.2试剂美国BectonDickinson公司HLA-B27kit:HLA

4、-B27-FITC(CloneGS145.2，IgG1kappa)；CD3-PE(CloneSK7，IgG1kappa)；HLA-B27CalibrationBead；溶血剂(Lysingsolution．1ysS)批号为340183，洗涤液及鞘液用CoulterIsotonII血细胞稀释液批号为8546733。　　1.1.3仪器美国BeckmanCoulterEPICSXL-MCL型流式细胞仪　　1.2方法　　1.2.1标本处理取HLA-B27-FITC/CD3-PE荧光抗体30ul、全血样本50ul加入流式专用试管底部，混匀，置于室温避光15min。

5、加10倍稀释后的溶血剂2ml，混匀，避光15min。1500r/min离心5min。弃上清液后用0.01NPBS洗涤两次，上机测定。　　1.2.2检测与结果判断①流式细胞仪校正使用BeckmanCoulter公司的FLOW-CHECK校准光路②样本检测取标准荧光微球1滴CalibrationBead，用1ml蒸馏水稀释，测到一标准峰。分析已经处理好的样本，选取以CD3-PE标记的淋巴细胞，并检测这群细胞HLA-B27的中间荧光强度(Mdx)，若中间荧光强度大于标准微球峰荧光强度即为阳性，反之则为阴性　　2结果　　HLA-B27在强直性脊炎患者（AS）和健

6、康体检者中检测结果如下：临床诊断：AS患者例数：56例。阳性例数：51例。阳性率为91.1%，健康体检者例数：51例。阳性例数：3例。阳性率为5.9%　　从上述结果可以看出,AS患者HLA-B27的阳性率高于健康体检者的阳性率。　　3讨论　　强直性脊椎炎(ankylosingspondylitis，AS)是一种慢性、进行性和炎性疾病，主要累及骶骼关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，主要症状是腰、骶及下肢关节疼痛，晚期患者脊柱僵硬呈板状，活动受限。HLA-B27与AS发病呈高度相关，其相关性为目前已知的HLA与疾病关系中关联性最强和最典型的一种[2]。有研究

7、表明，HLA-B27检测可提高X线诊断AS的阳性率，对AS早期尤其是X线表现不典型时具有良好的临床应用价值[3]。　　本实验结果提示AS患者HLA-B27阳性率显著高于正常人阳性率，但HLA-B27阳性不能诊断随机选择患者是否患有AS，因为非AS患者也有3%～7%的阳性率，但当临床症状体征及影像学检查怀疑有AS时HLA-B27阳性可作为诊断指标。如某患者诊断AS的可能性为50％，若患者阳性，则诊断AS的概率提高到95％左右；若该患者HLA-B27阴性，则患AS的概率降至3％左右。AS患者的临床症状与类风湿性关节炎有相似之处，因此对确诊为类风湿性关节炎的患

8、者要进行B27的检测，以免漏诊。少儿患者因骶髂关节骨后未闭合，也给炎症程度的判断