DB34∕T 2997-2017 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程.pdf

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1、ICS11.220B41DB34安徽省地方标准DB34/T2997—2017猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程ProtocolofexaminationforActinobacilluspleuropneumoniae文稿版次选择2017-12-30发布2018-01-30实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2997—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司

2、、安徽杜洛克种猪育种有限责任公司、颍上庆丰农牧发展有限公司。本标准主要起草人：孙裴、李郁、高亚飞、黄晓慧、崔文竹、魏建忠、殷宗俊、赵顾、张晓东、王希春。IDB34/T2997—2017猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程1范围本标准规定了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的检验的设备和材料、检验程序、操作步骤、与副猪嗜血杆菌鉴别、结果报告。本标准适用于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有

3、的修改单）适用于本文件。GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB14922.2实验动物微生物学等级及监测NY/T537猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术SN/T1447猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范3主要设备和材料3.1显微镜：物镜10倍～100倍。3.2电子天平：感量0.1g。3.3恒温培养箱3.4冰箱：2℃～5℃，-20℃。3.5无菌培养皿：直径90mm。3.6无菌试管：15mm×150mm。3.7无菌锥形瓶：容量250mL，500mL。3.8pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.9鸡表皮葡

4、萄球菌、金黄色葡萄球菌。3.10灭菌棉拭子。3.11革兰氏染色液：按照GB4789.28的规定执行。3.12鲜血平板培养基：制备方法见附录A中A.1。3.13营养琼脂培养基：按照GB4789.28的规定执行。3.14尿素琼脂培养基：按照GB4789.28的规定执行。3.15改良TSB肉汤培养基：制备方法见附录A中A.2。3.16改良TSA培养基：制备方法见附录A中A.3。3.17巧克力琼脂培养基(CA)：制备方法见附录A中A.4。3.18改良PPLO琼脂培养基(mPPLO)：制备方法见附录A中A.5。3.19糖发酵培养基

5、：按照GB4789.28的规定执行。3.20ONPG培养基：按照GB4789.28的规定执行。1DB34/T2997—20173.21缓冲葡萄糖蛋白胨水：按照GB4789.28的规定执行。3.22蛋白胨水：按照GB4789.28的规定执行。3.23硫酸亚铁琼脂：按照GB4789.28的规定执行。3.24硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂：按照GB4789.28的规定执行。3.25氧化酶试剂：按照GB4789.28的规定执行。3.26Rustigian氏尿素培养液：按照GB4789.28的规定执行。3.27无菌PBS溶液：制备方

6、法见附录A中A.6。4检验程序猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作程序见图1。图1猪传染性胸膜肺炎防线杆菌检验操作程序5操作步骤5.1采样、运输和保存5.1.1病料的采集标准应符合SN/T1447的相关规定。2DB34/T2997—20175.1.2活体样品采集用无菌棉拭子伸入鼻腔采集分泌物，放人无菌试管中立即送往实验室供分离。5.1.3组织样品的采集无菌采集具有典型病变的肺脏、肺门淋巴结、扁桃体等器官和鼻腔分泌物，并在死亡2h内完成。5.1.4血样的采集制备无菌操作采集动物血，每头不少于10mL。自然凝固后无菌分离血清，分

7、装，加盖密封后4～8℃保存。5.1.5样品运送采集的样品，均应在4～8℃条件下24h内送到实验室。脏器组织样品采集后延迟送检的，可保存于饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液中，保存时间不超过72h。5.2显微镜检查5.2.1采集的样品制成触片，革兰氏染色，镜检。5.2.2猪传染性胸膜肺炎放线杆菌形态学特征：革兰氏阴性小球杆菌或纤细的小杆菌，直径0.5～2nm，长度60～450nm。有荚膜和菌毛，不形成芽孢且无鞭毛，有的成双排列。新鲜病料中常呈两极着色，人工培养24～96h可见到丝状菌。5.3分离培养5.3.1对没有受污

8、染的新鲜病料用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于在血琼脂或改良TSA培养基上，于36℃±1℃培养24h±2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h±2h后观察。或无菌接种于改良TSB肉汤于37℃培养24h后，无菌操作将肉汤培养液划线接种于血琼脂或改良的TSA培养基上，37℃培养24h。5.3.2如被检样品