枯草芽孢杆菌表达手册 个人翻译中文版.pdf

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1、枯草芽孢杆菌表达载体产品信息和说明2005年11月目录1.简介.........................................................................................32.pHT载体...............................................................................32.1.pHT01载体图谱...................................

2、..............................42.2.pHT43载体图谱.................................................................52.3.pHT01衍生物中标签的定位.............................................53.实验方案............................................................................

3、...64.参考文献...............................................................................65.订单信息，运输和存储.......................................................6本载体系统由德国拜罗伊特大学遗传研究所的沃尔夫冈·舒曼实验室开发。仅用于科研！本手册由wy135033405翻译百度文库首发任何意见请PM枯草芽孢杆菌表达载体通过质粒在枯草芽孢杆菌中高效表达胞内/

4、胞外重组蛋白1.简介革兰氏阳性菌因其在农业，医疗和食品生物技术和重组蛋白生产等方面的贡献而广为人知。在所有革兰氏阳性菌中，枯草芽孢杆菌载体因下列原因尤为引人瞩目。（一）无致病性，且一般认为安全的有机体；（二）无明显的密码子偏好性；（三）可直接将功能性胞外蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌生产）；（四）具备包含转录，翻译，蛋白质折叠、分泌机制，遗传操作和大规模发酵的大信息量机体。但是下述两个障碍减少了枯草芽孢杆菌的使用：（一）产生一定数目的识别并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）载体质粒稳定

5、性。第一个障碍已因蛋白酶缺失株的构建而基本解决。第二个因引入使用θ-复制模式质粒被完全克服，如由天然质粒pAMβ1和pBS72衍生的一些质粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。最近，基于大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pMTLBS72的四种不同表达载体的构建和使用展示出全面的结构稳定性，业已出版（Nguyen等，2005）。两个新的载体pHT01和pHT43允许在细胞质中高水平表达重组蛋白，其中pHT43载体A引导重组蛋白到培养基。这两个载体基于强σ-依赖性启动子的枯草杆菌groE操纵子通过

6、添加lac操纵子改造成为一种高效可控的（IPTG诱导的）启动子。pHT01衍生载体可与8×His标签（pHT08），链球菌标签（pHT9）或C-Myc的标签（pHT10）相结合。2.pHT载体所有在枯草芽孢杆菌的groESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bgaB报道基因（Phan等，2005）。当分别将htpG和pbpE基因融合到groE启动子时，加入IPTG后，表达的

7、重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamHI,XbaI,AatII,SmaI）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。2.1.pHT01载体图谱Pgrac:Pgrac启动子（包含groE启动子；lacO操纵子和gsiBSD序列）CoIE1ori:CoIE1起始子RAmp:青霉素抗性基

8、因LacI:lacI基因(lac抑制子)RCm:氯霉素抗性基因完整的DNA序列可根据要求提供2.2.pHT43载体图谱Pgrac:Pgrac启动子（包含groE启动子；lacO操纵子和gsiBSD序列）CoIE1ori:CoIE1起始子RAmp:青霉素抗性基因LacI:lacI基因(lac抑制子)RCm:氯霉素抗性基因SamyQ:amyQ信号序列完整的DNA序列可根据要求提供2.3.pHT01衍生物中标签的定位p