FCM在肿瘤学研究中的应用.ppt

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1、FCM在肿瘤学研究中的应用MedlinePublicationsciting"Flowcytometry”0100020003000400050001960年1965年1970年1975年1980年1985年1990年1995年2000年YearPublicationsTheuseofflowinresearchhasboomedsincethemid-1980s应用范围实体肿瘤DNA倍体的FCM分析肿瘤病理的FCM分析肿瘤分子生物标志物的FCM分析细胞增殖和凋亡的FCM分析实体肿瘤DNA倍体的FCM分析理论依据G0期不参与增殖周期循环的一群细胞，即为静止期细胞，其细胞DNA含量为

2、较恒定的2C值（一）细胞周期实体肿瘤DNA倍体的FCM分析理论依据G1期细胞具有增殖活性，参与细胞周期循环的一群细胞G1期细胞值与G0期细胞DNA值相同，均为二倍体DNA含量（一）细胞周期实体肿瘤DNA倍体的FCM分析理论依据S期细胞DNA含量值逐渐增加，从2C值~4C值直到细胞DNA倍增结束（一）细胞周期G2/M期在M期分裂为两个子细胞之前，G2和M期细胞的DNA含量均为恒定的4C值，即为四倍体细胞群实体肿瘤DNA倍体的FCM分析理论依据（一）细胞周期实体肿瘤DNA倍体的FCM分析理论依据（二）荧光染料与细胞DNA的关系荧光染料可与细胞DNA特异性结合，并有一定的量效关系1DNA

3、含量的多少与荧光染料的结合成正比2荧光强度与DNA吸收荧光分子多少成正比实体肿瘤DNA倍体的FCM分析理论依据（二）荧光染料与细胞DNA的关系3荧光脉冲与组方图的通道值成正比因此，FCMDNA定量分析一个细胞群时，可将二倍DNA含量分布组方图分为三部分，即G0/G1，S，G2/M。G0/G1和G2/M细胞峰DNA的分布均成正态分布。S期可以认为是一个加宽的正态分布实体肿瘤DNA倍体的FCM分析G1SphaseG2MG1121DNAcontentTheCellCycleG0/1G2/MS实体肿瘤DNA倍体的FCM分析DNA含量的计算方法1FCM定量分析一个细胞群，其DNA含量值是以D

4、NA指数(DNAindex:DI)表示其相对DNA含量的实验样品细胞G0/1峰的均道值DI=---------------------------------------正常细胞G0/1峰的均道值实体肿瘤DNA倍体的FCM分析DNA含量的计算方法2一个正常的二倍体细胞峰，其G0/G1期细胞DNA含量为2C，DI值为1.0，G2/M期细胞DNA含量为4C，DI值为2.0实体肿瘤DNA倍体的FCM分析DNA含量的计算方法例如如果一个未知DNA含量的细胞群G0/G1期细胞峰的均道值在60道，正常二倍体标准细胞G0/G1峰均道值也在60道，那么，这个未知DNA含量的细胞群DI=1.0。如果

5、一个未知DNA含量的细胞群G0/Gl峰均道值在90道，DI=1.50实体肿瘤DNA倍体的FCM分析DNA倍体的判定标准DNA倍体的判定是根据所测细胞群DNA含量分布组方图G0/G1峰的DNA相对含量值，即DNA指数值进行判定的，从理论上讲，二倍体的DI值应为1.0，四倍体的DI值应为2.0实体肿瘤DNA倍体的FCM分析DNA倍体的判定标准以二倍体参考标准细胞G0/G1期细胞DNA含量定为2C值,DI=1.0，基于标准二倍体细胞的CV值在5%，判定标准即：DNA二倍体＝2C士2CV值DNA异倍体≠2C士2CV值实体肿瘤DNA倍体的FCM分析DNA倍体的判定标准即DI＝1.0士0.1(

6、0.9－1.10)为二倍体DI＝1.0士0.15(0.85－1.15)为近二倍体DI=2.0士2CV(1.90－2.10)为四倍体DI>2.10多倍体其余DI值均为非整倍体在计算DNA异倍体时，把近二倍体，多倍体，四倍体，非整倍体划为异倍体(Heteroploidy)的范畴实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型自FCM被引入肿瘤研究以来,已经对各类型新鲜肿瘤组织和石蜡包埋肿瘤组织进行DNA倍体的定量分析,为研究肿瘤DNA含量的分布状态,提供了非常直观的参考信息实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型DNA组方图常见的类型以单一DNA干系多见,说

7、明肿瘤的发生多以单一细胞克隆发生而来。我们对3050例恶性肿瘤DNA倍体分析结果显示,单一DNA干系的组方图占80-90%左右,双干系或多干系的DNA组方图较少见实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型实体肿瘤DNA倍体的FCM分析FCMDNA倍体的组方图类型实体肿瘤DNA倍体的