DB34∕T 2404-2015 猪丹毒杆菌检验规程.pdf

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1、ICS11.220B41DB34安徽省地方标准DB34/T2404—2015猪丹毒杆菌检验规程Protocolofexaminationforswineerysipelas文稿版次选择2015-07-14发布2015-08-14实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2404—2015前言本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽农业大学、安徽省猪病监测工程技术中心提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农业大学、安徽省猪病监测工程技术中心。本标准主要起草

2、人：李郁、孙裴、李泉生、钱昌银、魏建忠、檀华蓉、张联合。IDB34/T2404—2015猪丹毒杆菌检验规程1范围本标准规定了猪丹毒杆菌的检验方法。本标准适用于猪丹毒杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂NY/T566猪丹毒诊断技术3设备和材料3.1显微镜：物镜10倍～100倍。3.2电

3、子天平：感量0.1g。3.3恒温培养箱：36℃±1℃3.4冰箱：2℃～5℃。3.5无菌培养皿：直径90mm。3.6无菌试管：15mm×150mm。3.7无菌锥形瓶：容量250mL，500mL。3.8pH计或pH比色管或精密pH试纸。4培养基与试剂4.1饱和氯化钠溶液：见附录A中A.1。4.230％甘油缓冲盐水溶液：见附录A中A.2。4.3革兰氏染色液：按照GB/T14926.43-2001中的3.1规定。4.4血液琼脂培养基：按照GB/T14926.43-2001中的4.4规定。4.5血清琼脂培养基：

4、见附录A中A.3。4.6马丁肉汤：见附录A中A.4。4.7磷酸盐缓冲液（PBS）：按照GB/T14926.43-2001中的4.13规定。4.8糖发酵培养基：按照GB/T14926.43-2001中的5.1规定。4.9缓冲葡萄糖蛋白胨水：按照GB/T14926.43-2001中的5.5规定。4.10营养明胶：按照GB/T14926.43-2001中的5.14规定。4.11蛋白胨水：按照GB/T14926.43-2001中的5.4规定。4.12硫酸亚铁琼脂：见附录A中A.5。1DB34/T2404—20

5、154.13硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂：按照GB/T14926.43-2001中的5.7规定。4.14氧化酶试剂：按照GB/T14926.43-2001中的5.8规定。4.15胰蛋白胨水：见附录A中A.6。4.16马尿酸钠培养基：按照GB/T14926.43-2001中的5.18规定。5检验程序猪丹毒杆菌检验程序见图1。检样显微镜检查分离培养动物试验直接涂片血液或血清马丁肉汤琼脂平板革兰氏染色临症表现病理变化选取可疑菌染色镜检镜检落涂片镜检、纯培养生化反应分离培养PCR鉴定猪丹毒杆菌血清型鉴定结果报

6、告图1猪丹毒杆菌检验程序6操作步骤6.1采样、运输和保存6.1.1急性败血型猪丹毒可采取肾、脾、肝、心血、淋巴结；亚急性疹块型猪丹毒可采取疹块及其周围皮肤；慢性型猪丹毒可采取肿胀的关节液、心脏瓣膜增生物。6.1.2脏器组织样品采集后需延迟送检的，可保存于饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液中，保存时间不超过72h。6.1.3样品均需采取低温（0～4℃）保存和运输。6.2显微镜检查2DB34/T2404—20156.2.1采集的样品制成涂片，革兰氏染色，镜检。6.2.2猪丹毒杆菌形态学特征革兰氏阳性小

7、杆菌，在动物组织中呈断发状小短杆菌体，大小为0.2～0.4×0.8～2.5μm，无芽孢，无荚膜，无鞭毛，常单独或排列成短链，在慢性病例的动物体内或陈旧培养基中呈现细长弯曲的长丝状。6.3分离培养6.3.1对没有受污染的新鲜病料可直接接种在血液琼脂或血清琼脂培养基上，37℃培养24～48h。或经马丁肉汤37℃培养24h后，再转种于血液琼脂或血清琼脂培养基上，37℃培养24h。6.3.2如被检材料已腐败或被污染，可在上述培养基中加入1/100万结晶紫和1/5万叠氮钠，或加入新霉素（400μg/mL）或万古

8、霉素（70μg/mL），抑制其他杂菌生长。6.3.3在血清琼脂上菌落特征细小、圆形、透明、凸起、灰白色、有光泽、质软、露珠样、易混悬于盐水中。6.3.4在血液琼脂上菌落特征同6.3.3，并形成绿色的狭窄溶血环（α溶血）。6.3.5在马丁肉汤中生长特征轻度混浊，振动试管呈现出云雾状，有少量灰白色粘稠沉淀，不形成菌膜和菌环。6.4生化反应试验糖发酵反应常不规则，一般可分解葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖，产酸不产气；不分解木糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖。产生硫化氢，不