碱性磷酸酶基因实验论文.doc

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1、.本科生基因工程实验论文 碱性磷酸酶基因 ..碱性磷酸酶基因 表达载体的构 建及在大肠杆菌中的表达内蒙古大学生命科学学院生物系本科生基因工程实验论文碱性磷酸酶基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达刘帆01011017生物科学摘要碱性磷酸酶广泛分布于人体各脏器器官中这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸 基团从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。碱性磷酸酶在酶联 免疫等生化检测中有重要作用是许多生化反应试剂盒的检测酶。从大肠杆菌提取的碱 性磷酸酶成本低热稳定性好而且能用基

2、因方法实现蛋白质定向标记等。本文主要介 绍利用基因工程实验技术操作碱性磷酸激酶基因将已经连接在pMD19-T载体上的碱性 磷酸激酶酶源基因用PCR扩增出837bp的碱性磷酸激酶的基因片段与T载体连接后导 入感受态的DH5α菌中筛选鉴定。用双酶切切下碱性磷酸激酶的成熟基因片段插入带 有6个组氨酸标签的原核表达载体pET-his导入BL(21)DE3感受态菌中诱导表达碱性 磷酸激酶蛋白质用SDS-PAGE鉴定。 关键词碱性磷酸酶基因表达载体大肠杆菌SDS-PAGEConstructionandExp

3、ressionofAlkalinePhosphataseExpressionVectorin E.coli ABSTRACTAlkalinephosphataseisawidelydistributedinhumanorgansinvarious organs,theenzymecatalyzesthenucleicacidmoleculeoffthe5'phosphategroup,sothat theDNAorRNAfragmentsofthe5'-Pterminalconverts5'-OHends

4、.Alkalinephosphatase inELISAandotherbiochemicaldetectionplaysanimportantroleinmanybiochemical reactionskitdetectionenzymes.ExtractedfromE.colialkalinephosphatase,lowcost,good ..thermalstability,butalsocanbeusedgeneticmethodstoachieveproteinorientation mark

5、ings.MainofthisarticledescribethegeneengineeringoperationinBAPgenewhichhas alreadyconnectedwithpMD-1-TvectoramplifiedbyPCRinwhichcanget837bp nattokinasegenefragments,thenliBAPingwithTvectorthattransformitintoDH5αbacteria whichwerescreenedafteridentificatio

6、n.Thematurepeptidecanbecuttedbydouble-digested andinsertwithsixhistidine-taggedprokaryoticexpressionvectorpET-his.Atlast,inducedthe proteinexpressionofnattokinaseintheexpressionofE.coliBL(21)DE3.Eventually, identifythatbySDS-PAGE.KEYWORDS:Bacterialalkaline

7、phosphatase,geneexpression,vectorE.coli,SDS-PAGE内蒙古大学生命科学学院生物系本科生基因工程实验论文目录引言.....................................................................................................................1 材料与方法......................................................

8、..................................................... 1材料............................................................................................................. 1.1试剂、仪器及实验用具............................