药代动力学实验.ppt

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1、药物代谢动力学实验赵娣中国药科大学药代研究中心2012年10月16日神农尝百草传说神农一生下来就是个“水晶肚”，几乎是全透明的，五脏六腑全都能看得见，还能看得见吃进去的东西。那时候，人们经常因乱吃东西而生病，甚至丧命。神农为此决心尝遍百草，能吃的放在身体左边的袋子里，介绍给别人吃；不好吃的就放在身体右边袋子里，作药用。不能吃的就提醒人们注意。3生物样品药物代谢动力学定量研究药物（包括外来化学物质）在生物体内吸收、分布、排泄和代谢（简称体内过程）规律的一门学科。常用测定方法HPLC-UV?GC-MS?LC-MS/MS?数据处理分析1.HPLC原理与标准操作规程(S

2、OP)2.实验设计与动物实验3.样品处理与方法开发4.定性定量与分析测定5.数据处理与药动学参数计算6.实验报告实验安排静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究HPLC原理与标准操作规程(SOP)1.HPLC的组成2.分配色谱的原理3.色谱柱4.流动相5.定性与定量方法6.样品的预处理7.反相色谱分析方法的开发HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC的组成Pump泵Injector/Autosampler进样器/自动进样器Column色谱柱Detector检测器DataSystem/Integrator数据系统/积分仪表高

3、效液相色谱系统高效液相色谱系统SHIMADZULCMS-2010EVLC-MS/MSThermoTSQQuantumAccess分配色谱的分离机理分配色谱概述反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱常用的流动相：有机溶剂如甲醇、乙腈，水应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法常用固定相：碳十八、碳八、胺基等基团反相色谱固定相多为键合相对HPLC柱的了解色谱柱分类填料，含碳量，基质，粒径色谱柱的应用正相柱，反相柱，预处理柱色谱柱的规格岛津ShimadzuVP-ODS;150L×2.0;5μm;柱号8082693.键合相色谱柱以硅胶

4、为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上，作为固定相。优点∶固定相稳定，不易流失应用广泛，可使用多种溶剂消除硅羟基的不良影响缺点∶pH值不能小于3同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同反相C18色谱柱的活化步骤一：90%甲醇1mL/min流速冲洗30min步骤二：10%甲醇1mL/min流速冲洗30min步骤三：90%甲醇1mL/min流速冲洗60min色谱柱的存放存放前的处理除去杂质、盐合适的存放溶剂避免色谱柱床的干枯避免机械震动防止细菌生长注意存放的温度液相色谱对流动相的要求除色谱柱对流动相对的要求外，还有∶与检测器匹配脱气避免卤素离子（不

5、锈钢系统）溶剂的粘度细菌的生长流动相的脱气流动相脱气的目的使色谱泵的输液准确输液均匀准确，并且脉动减小保留时间及色谱峰面积的重现性提高提高检测的性能防止气泡引起的尖峰基线稳定，信噪比增加溶剂的紫外吸收本底降低保护色谱柱减少死体积防止填料的氧化流动相脱气的方法加热简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成的变化抽真空同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果超声波简单，但效果不理想。通惰性气体（一般用氦气）可保持连续脱气，多用于低压梯度脱气机可保持连续脱气，多用于低压梯度色谱峰定性鉴别每个色谱峰通过比较保留值(通常是保留时间)的方法，找到各色谱

6、峰所对应的组份大多数情况下用比较保留时间来定性即所谓：保留时间相同，可能是同样的组份保留时间不同，肯定不是同样的组份用保留时间定性用“标样”的保留值定出被测组份的位置标准加入法举例废水样品中五氯苯（PCP）的分析PCP4ppm3ppm2ppm1ppm常用的定量方法峰面积百分比法由于检测技术的影响，在液相色谱中不常用外标法在液相色谱中用的最多内标法准确，但是麻烦在标准方法中用的最多外标法定量配制一系列已知浓度的标样外标法定量（二）实际色谱图标准曲线内标法定量（一）配制一系列浓度的标样，其中加有内标样内标法定量（二）实际色谱图标准曲线内标法定量（三）对内标物的要求化

7、学结构与待测组分相似(同系物、异构体)在样品中不存在不与样品中组份发生任何化学反应保留值与待测组分接近浓度（响应值）与待测组分相当其色谱峰与其他色谱峰分离好可接收的检测范围校正曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误样品的预处理样品预处理的目的除去微粒减少干扰杂质浓缩微量的组份提高检测的灵敏度及选择性改善分离的效果有利于色谱柱及仪器的保护样品的预处理重要性占样品分析时间的比例样品预处理所用时间远大于色谱分离的时间占分析的消耗总成本最大消耗大量的溶剂及其他化学品实验的重复性及准确性最差的环节影响实验结果好坏的最重要因素是决定性的步骤

8、样品预处理常用的方法高速