常用缓冲液配置.doc

《常用缓冲液配置.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在PPT专区-天天文库。

1、实验室常用缓冲液配置方案1)1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：1MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HCl7.4约70ml7.6约60ml8.0约42ml4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个

2、单位。2)10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris－HClBuffer（PH7.4，7.6，8.0）100ml500mMEDTA(PH8.0)20ml2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。3)1.5MTris-HCl(pH8.8)组份浓度：1.5MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.称量181.7gTr

3、is置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。4)3M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水

4、将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5)PBSBuffer组份浓度：137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：1L配制方法：1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补

5、充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6)10M醋酸铵组份浓度：10M醋酸铵配制量：100ml配制方法：1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法：1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的

6、分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。8）10％(W/V)SDS组份浓度：10％(W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。9）2NNaOH组份浓度：2NNaOH配制量：100ml配制方法：1.量取80ml去离子水置

7、于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10）2.5NHCl组份浓度：2.5NHCl配制量：100ml配制方法：1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N)，均匀混合。2.室温保存。11）5MNaCl组份浓度：5MNaCl配制量：1L配制方法：1.称取292.2gNaCl置于1L

8、烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4℃保存。11）20％(W/V)Glucose组份浓度：20％(W/V)Glucose配制量：100ml配制方法：1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.高温高压灭菌后，4℃保存。12）SolutionI(质粒提取用)组份浓度：25