黄油中8种类固醇激素的液相色谱／串联质谱检测.pdf

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1、第42卷分析化学(FENXIHUhXt~)研究报告第3期2014年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry360～366DOI：10．3724／SP．J．1096．2014．30857黄油中8种类固醇激素的液相色谱／串联质谱检测赵超敏岳振峰吴晖欧阳姗赖富饶肖陈贵张毅康海宁华红慧(华南理工大学轻工与食品学院，广州510640)(深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，深圳市食品安全检测技术研发重点实验室，深圳518045)(中山大学生命科学学院，广州510275)摘要建立了黄油中雌酮、一雌二醇一雌二醇、雌三醇、睾酮、表睾酮、孕酮和丙酸睾酮8种类固醇激素的凝

2、胶渗透色谱(GPC)-液相色谱／串联质谱(LC—MS／MS)检测方法。样品用乙酸乙酯一环己烷(1：1，V／V)提取，提取液经GPC柱净化除脂，GPC浓缩液采用cl8色谱柱(100mmx2．0mmi．d．，3．0m)分离，以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，电喷雾电离多反应监测模式进行定性和定量分析。8种类固醇激素以基质匹配外标法定量，药物在1．0—20．0g／kg线性范围内相关系数(r)均大于0．999；方法检出限(S／N=3)为0．04～0．30g／kg，定量限LOQs(s／Ⅳ=10)为1．0g／kg；添加水平为1．0，2．0，4．0g／kg时，回收率范围在64．1％～110％之间；相对标准

3、偏差(RSD)小于11％。结果表明，本方法准确、可靠，满足黄油中8种类固醇激素的检测分析要求。关键词雌性激素；雄性激素；孕激素；黄油；液相色谱．串联质谱；凝胶渗透色谱1引言激素分析一直是诊断类固醇激素合成和代谢紊乱的重要手段⋯。动物源食品中激素残留的检测经常被报道，因为激素可被用于畜牧业以提高饲料转化率，达到促进动物生长发育、动物的同期发情及增加体重和育肥等目的，如雌二醇和睾酮等J。动物源食品中的激素残留通过食物链进人人体会产生健康危害，如生长发育障碍、出生缺陷和生长发育缺陷等J。我国农业部176号_4J、193号和235号公告明确规定，在动物食品中不得检出雌二醇和丙酸睾酮等激素类药物，许

4、多国家和地区已禁止某些类固醇激素作为动物促生长剂。黄油主要由甘油三酯(98％)、甘油二酯、单甘油酯和游离脂肪酸组成，已确定的脂肪酸约有500种，其它组分包括磷脂、脑苷脂、固醇、脂溶性维生素(V，V。和V)、色素(胡萝卜素)、矿物质和风味组分等。其中亚油酸的异构体共轭亚油酸具有抗癌、抗动脉粥样硬化、抗高血压和提高免疫力等功能；人类共轭亚油酸主要来自反刍动物食品，奶制品约占70％12]。黄油因其营养价值、供能特性、良好的质构和口感特性而受到广泛欢迎，越来越多地被用于焙烤工业和餐饮业，中国2012年黄油累计进口量同2011年相比，同比增加10．6％_】。人造黄油虽和黄油具有类似的食品加工特性，但

5、其主要成分为氢化植物油和食品添加剂，基本没有激素残留的风险，营养价值也较差。关于动物源食品中激素的研究报道多是关于猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉和肝脏¨、牛奶_l、鸡蛋和水产品等，尚未见到黄油等高脂肪含量样品的报道。黄油脂肪含量高，因此选择去除油脂效果良好的凝胶渗透色谱法(GPC)净化。GPC净化技术已成功应用于农药残留分析【1，近年来也有关于药物残留分析的报道，只有少量报道是关于激素分析口。’2。类固醇激素的常用检测分析方法有GC—MS法和LC—MS／MS法等J，但是GC-MS法灵敏度低，并且需要衍生化，过程复杂且耗时；LC．MS／MS法灵敏度高、重复陛好、分析时间短，因此本文选择了全自动GPC

6、净化系统与LC—MS／MS相结合检测黄油中的8种类固醇激素(图1)，净化效果好、回收率高、灵敏度高和重现性好，满足残留分析技术要求。2013-09-04收稿；2014—11-06接受本文系国家质检总局局科技计划基金(No．2010IK137)，广东省省部产学研项目基金(No．2O1OBo9O4oo342)，“双打”质检公益项目子课题基金(No．2012104003-4)资助E—mail：yuezhenfeng@163．corn；fehwu@scut．edu．cn第3期赵超敏等：黄油中8种类固醇激素的液相色谱／串联质谱检测361HOE1OHCHOHs。TP图1类固醇激素结构式Fig．1Str

7、uctureformulasofsteroidhormonesE1：雌酮，E3：雌三醇，—E：a一雌二醇，／3-E：／3一雌二醇，T：睾酮，EpiT：表睾酮，T-P：丙酸睾酮，P：孕酮。E1：Estrone，E3：Estriol，—E：Ot—Estradiol，E：／3-Estradiol，T：Testosterone，EpiT：Epitestosterone，TP：Testosteronepropionate，P：Pr