模拟移动床色谱法分离纯化链甾醇.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第6期2013年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry851～855DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．20853模拟移动床色谱法分离纯化链甾醇许青青孔利云李敏苏宝根杨亦文任其龙(浙江大学生物质化工教育部重点实验室，杭州310027)(衢州学院化学与材料工程学院，衢州324000)摘要以羊毛脂中提取的链甾醇为原料，采用模拟移动床色谱法(SMBC)进行了分离纯化。以C。为固定相，甲醇为洗脱液，采用四区SMBC系统，每区有两根色谱柱(150mm~10mm~10岬)，经过两次SMB

2、C分离，得到高纯度链甾醇产品。以纯度、生产率和溶剂消耗量为指标，确定链甾醇在SMBC中的最佳分离条件为：切换时间6Amin，四区流量分别为9．97，7．53，8．53和4．97mL／min，进料流量1．00mL／min(第一次SMBC分离)；切换时间6．0min，四区流量分别为9．95，7．98，8．53和6．62mL／min，进料流量0．55mL／min(第二次SMBC分离)。结果表明，以90．1％含量的链甾醇粗品为原料，在优化实验条件下，先除去吸附能力比链甾醇强的杂质，再除去吸附能力比链甾醇弱的杂质，得到高纯度(≥98．9％)的链甾醇产品，回收率为93．8％。关键词模拟移动

3、床色谱；反相高效液相色谱；分离纯化；链甾醇1引言链甾醇又名3．羟基-5，24一胆甾二烯、24一去氢胆固醇(3／3．Cholesta．5，24一dien．3一ol，desmosterol，CASNo：313-04．2，分子式CH0)，为白色或近白色的晶体或粉末，不溶于水，溶于正己烷、石油醚等非极性溶剂，易溶于醇类等极性较大的溶剂。链甾醇和胆固醇的分子结构非常相似，不仅具有胆固醇的某些生理作用，还是重要的医药中间体，在作为许多具有生理活性的甾类化合物的合成初始原料方面比胆固醇更有优势，广泛应用于医药、化工、生化等领域。例如链甾醇在24位多一个双键，在25位上少了一个羟基，将双键打开

4、，增加一个羟基，是一个较容易实现的合成反应。因此，链甾醇是制备25．羟基维生素D关键中间体25-羟基胆固醇的最佳原料。链甾醇可通过有机反应全合成或半合成制得[1]，也可从动植物中提取分离得到J。前者往往因起始物难获得或反应步骤长，收率低而不具工业价值。后者通常采用溶剂提取获得链甾醇粗品，但纯度都较低，达不到商品品质要求，需进一步分离纯化。目前，链甾醇分离纯化方法有合成转化法、AgNO，络合色谱法J、硅胶柱层析法【9]、高效液相色谱法(HPLC)¨，最近又发展出溶剂结晶法1、萃取法和固定床吸附法。其中，合成转化法采用汞盐将链甾醇转化成25一羟基胆固醇后，再层析或结晶、皂化，才能得

5、到较高纯度的链甾醇，其方法较为繁琐，且Hg毒性大，易造成污染不利于工业生产。AgNO络合色谱法比较费时、成本高，也难以工业化。硅胶柱层析法若采用复合硝酸银的硅胶柱层析会引入放射性的杂质，而单纯以硅胶柱层析分离，分离一个样品至少需要3d时间。HPLC法采用C。。反相柱，以乙腈、乙腈-甲醇或甲醇溶液为流动相，可以分离得到链甾醇、胆固醇及7一去氢胆固醇等许多甾醇，但它们仅适合分析样品的制备。溶剂结晶法、萃取法和固定床吸附法具有生产成本低、污染少，适于工业化生产，但经过活性炭吸附或不同溶剂多次结晶得到的链甾醇产品纯度通常仍低于90％，且还含有大量结构相近的未知杂质，达不到链甾醇分离的高

6、纯度要求。本研究采用反相高效液相色谱法(RP．HPLC)，并考虑到工业生产的需要，结合能够连续操作且分离效果较固定床吸附更好的模拟移动床色谱(SMBC)，分离纯化链甾醇，取得了满意的结果。2实验部分2．1仪器与试剂Waters液相色谱系统(美国Waters公司)，包括1525HPLC泵、717Plus型自动进样器、2487紫外检2012-08-21收稿；2012—12-06接受本文系国家“十二五”科技支撑计划项目(No2011BAD23B03)和浙江省基金重点项目(No．Z4090327)资助E—mail：ceywyang@zju．edu．cn852分析化学第41卷测器和柱温箱

7、；AL204101电子分析天平(梅特勒一托利多仪器有限公司)。KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DZF-6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。EYELA旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；C9116CSEP~SMB系统(德国Knauer公司)，配备一个l6通旋转阀，可接16根色谱柱。在实际应用中只接了8根(150mmxlOmmxlOtxm，c球状硅胶填充，日本YMC公司)，另外还包括进样泵、洗脱泵、提取泵和提余泵等，其系统连接如图1所示。SMB系统有4个