贝类毒素的测定.ppt

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1、贝类毒素的测定生物法一、麻痹性贝类毒素（PSP）Para1yticalshellfishpoisoningPSP中毒是最常见的食用贝类中毒PSP由一组石房蛤毒及其衍生物组成，PSP与涡鞭毛藻的水华有关（＞106个细胞／升）PSP在世界范围内分布PSP中毒引起神经系统紊乱，呼吸困难，感觉窒息，心肺衰竭而在2—24小时内死亡一般PSP中毒在0.5-2h的时间内，症状逐渐发展，能承受12h以上的中毒者一般能康复麻痹性贝类毒素的测定方法国际上麻痹性贝类毒素的检测方法较多，主要有小白鼠法、高效液相色谱法、酶联免疫法、放射

2、性免疫法等。生物法(即小白鼠法)是国际惯用的麻痹性贝类毒素的测定方法，已被美国公职分析化学家协会《公定分析方法》（AOAO）收入，而成为最普遍应用的检验方法。生物法(即小白鼠法)，系采用ICR系列的小白鼠作为检验动物，进行贝类毒素分析生物法(即小白鼠法)优势：当使用生物法检测法时，一旦发现超标样品，则本批样品不得食用，这说明所检测贝类中相关的毒素含量已经影响到人们的食用安全，不适合食用。麻痹性贝类毒素的测定　生物法(SC/T3023-2003)原理根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出鼠单位，计算确定每100

3、g贝肉中PSP的含量特点：测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性贝类毒素的总量鼠单位mouseunit，MU：对体重为20g的小白鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在15min时死亡所需的最低毒素量试剂盐酸溶液：0.1mol/L盐酸溶液：5mol/L氢氧化钠溶液：0.1mol/L仪器和设备均质器天平（感量0.1g）离心机pH计秒表玻璃皿；烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等注射器：1mL注射器针头：8#小白鼠：体重为19-21g的健康ICR系雄性小白鼠若体重＜19g或＞21g，查表中的校正系数便可得到校正的死

4、亡时间体重＞23g、或已用过的小白鼠则不能使用样品的测定检样的制备贝类洗净外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取贝肉，收集沥水5min（避免贝肉堆积），捡出碎壳等杂物，将贝肉均质注意：取肉时切勿割破肉体，开壳前不能加热或用麻醉剂样品的测定检样的制备贝类罐头1.将罐内所有内容物（包括贝肉组织及汁液），于均质器中均质2.大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质冷冻贝类在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈半冷冻状态，按上述规定的方法清洗、开壳、

5、淋洗、取肉、均质样品的测定提取取100g样品于800mL烧杯中，加0.1mol/LHCl溶液100mL充分搅拌，检查pH（pH应为2.0-4.0）。需要时，可逐滴加入5mol/LHCl溶液或0.1mol/LNaOH溶液调整pH，加碱时速度要慢，同时需不断搅拌，防止局部碱化破坏毒素将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温，调节pH至2.0-4.0（切勿＞4.5）。将混合物移至量筒中并稀释至200mL样品的测定提取将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可必要时将混合物或上

6、清液以3000r/min离心5min，或用滤纸过滤保留进行小鼠注射用的足量液体（约10mL）样品的测定小鼠试验选择ICR系小鼠称重：以感量为0.1g的天平将小鼠称重并记录重量样品的测定小鼠试验每个样品注射3只小鼠，每只小鼠腹腔注射1mL提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠记录注射完毕时间，仔细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时间（到小鼠呼出最后一口气止）样品的测定小鼠试验若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样品的毒力若小鼠

7、的死亡时间小于5min，则要稀释样品提取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到5min-7min的死亡时间稀释提取液时，要调节pH至2.0-4.0,逐滴加入0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液结果的计算与判断毒力的计算根据小鼠的死亡时间，在附录B中查出相应的每毫升注射液的鼠单位数M将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于＜0.875MU若试验动物重量＜19g或＞21g。则根据附录C查出重量校正系数k样品中PSP的含量按公式（1）计算。……………（1）式中：X—样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位（M

8、U/100g）Ki—每只小鼠的重量校正系数Mi—每只小鼠的鼠单位数，鼠单位（MU）D—样品提取液的稀释倍数200—样品量，克（g）结果的计算与判断毒力单位转换样品中的毒力单位的按公式（4）计算。F·80µg/100g＝400MU/100g………（3）F=5式中：F—毒素转换系数；80µg/100g—样品中PSP限量，µg/100g400MU/100g—样品中PSP限量，MU/100g二