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《GBT5009.198-2003 贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、】〔567.040C53(G黔中华人民共和国国家标准GB/T5009.198-2003贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定Shellfishes-Testmethodofdomoic.acidinamnesicshellfishpoisoning2003-08-11发布2004-01-01实施华人民共和国卫生部国国家标准化管理委员会GB/T5009.198-2003前言本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人:卫锋、王竹
2、天、陈明生、王玉萍、唐守亭。cs/T5009.198-2003贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定1范围本标准规定了海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品(不包括盐渍制品)的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的检验。本标准检测限为1.。1'g=本标准线性范围为1(ag^-250pg,2原理试样以甲醉/水提取，经LC-SAX强阴离子柱固相萃取(SPE)净化，用RP-HPLC定量分析。3试荆3.1甲醇:色谱纯。3.2
3、乙睛:色谱纯。3.3三氟乙酸:优级纯。3.4一水柠檬酸:优级纯。3.5柠檬酸三按:优级纯。3.6乙睛+水(1+9),3.70.5mol/L柠檬酸溶液(pH=3.2):40.4g一水柠檬酸和14.0g柠檬酸三按溶解于400mL水中，以浓氨水调pH=3.2，加人50mL乙睛，完全溶解后，以水定容至500mL,3.8LC-SAX柱:3mL,3.9标准储备液:DACS-1C(100Kg/mL)，或相当者。3.10软骨藻酸标准溶液:以乙睛十水(1+9)稀释标准储备液分别配成为含软骨藻酸。.1J.0,2.5,10.0,25.
4、。pg/mL的标准工作溶液。4仪器4.1高效液相色谱仪:配有二极管阵列或紫外检测器。4.24.3组织均质器:最大转速20000r/min,台式高速离心机:最大转速6000r/min,4.涡旋均匀器。4.5超声波清洗器。5分析步骤5.1提取称取试样5.0g(精确到。.1g)于50mL加盖离心管中，加人10mL甲醇+水(1+1)溶液，涡旋混匀1min,超声提取5min，以4000r/min离心20min，使固液两相彻底分离。移出上清液至25mL容量瓶中，残渣再加人5mL甲醇+水(1+1)重复提取两遍，上清液均移人25
5、mL容量瓶中，以水定容至刻度，混匀。565GB/T5009.198-20035.2净化取上述提取液5.0mL移人依次经6mL甲醇,3mL水，3mL甲醇+水(1+1)处理过的LC-SAX柱上，待液体以1滴/S的速度流出后，再依次用5mL乙睛+水(1+9),0.5mL柠檬酸洗脱液以1滴/S的速度过柱，弃去流出液，最后用2mL柠檬酸洗脱液洗脱吸附在柱上的软骨藻酸，供HPLC测定。注意:在液体过柱时，当液体凹液面下端与柱填料上端水平时，停止液体流出，避免LC-SAX柱填料与空气接触。5.3测定5.3.1色谱条件5.3.1
6、.1色谱柱:ZorbaxSB-C,8,150mmX4.6mm(i.d),5pm，或相当者;5.3.1.2流动相:乙睛+0.1%三氟乙酸(13+87);5.3.1.3流速:1mL/min;5.3.1.4进样量,10pL;5.3.1.5测定波长:242nm;5.3.1.6柱温:室温。5.3.2色谱测定分别取样液和标准溶液各10FaL(或相同体积)注人高效液相色谱仪进行测定，以保留时间定性，峰面积定量。在上述色谱条件下，软骨藻酸的保留时间约为6.6min。软骨藻酸标准溶液液相色谱图见图1,图1软骨燕酸标准样品液相色谱图
7、5.4空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。结果计算AXc,XVX1000....⋯⋯。.·..·..·..··⋯⋯(1)A=X二X(V;/V)式中:X—试样中软骨藻酸含量，单位为毫克每千克(mg/kg);A—样液中软骨藻酸峰面积;GB/T5009.198-2003A.—标准溶液中软骨藻酸峰面积;‘，—标准溶液中软骨藻酸浓度，单位为微克每毫升(jag/mL);m—称取的试样质量，单位为克(9)。V,—试样提取液总体积，单位为毫升(mL);VZ—净化用提取液体积，单位为毫升(mL);V3—洗脱液体积，单位为毫升
8、(mL)。计算结果保留两位有效数字。注:计算结果需扣除空白值，报告结果时以贝类中可食组织部分的记忆丧失性贝类毒索软骨藻酸的含量(mg/kg)报告结果。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%o
