台风过后网箱养殖大黄鱼恢复过程中血清代谢物变化的研究.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第9期2010年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1249～1255DOl：10．3724／SP．J．1096．2010．01249台风过后网箱养殖大黄鱼恢复过程中血清代谢物变化的研究徐继林严小军陈德莹徐善良骆其君王亚军(宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波315211)摘要为了考察台风影响后鱼类恢复过程中血清代谢物的变化，利用超高效液相色谱一四极杆．飞行时间质谱，电喷雾电离源分别在正负离子模式下，对超强台风

2、“罗莎”影响后的象山港网箱养殖大黄鱼血清进行为期半个月的测定，并通过SIMCA—P软件进行主成分分析和正交偏最小二乘法辨别分析。结果表明，大黄鱼恢复过程中潜在生物标志物主要为磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱。另外还有皮五醇和牛黄胆酸。其中，溶血磷脂酰胆碱、含高不饱和度脂肪酰基的磷脂酰胆碱(总不饱和度之和大于9)和牛黄胆酸在恢复过程中均呈现增加的趋势；而含低不饱和度脂肪酰基的磷脂酰胆碱(总不饱和度之和小于8)和皮五醇则呈现减少的趋势。这些代谢指标物的变化，体现了大黄鱼在台风后恢复过程中，通过皮质类激素调节脂类物质代

3、谢的结果。关键词台风；网箱养殖；大黄鱼；代谢指标物；超高效液相色谱；四极杆一飞行时间质谱1引言台风是我国东南沿海海水养殖业，特别是海水网箱养殖所面临的主要自然灾害。在台风过程中，因大量降雨，极易引起海水网箱养殖区温度跃层、盐度跃层、溶氧跃层和pH值降低，加上风力、海流等物理因素的改变，鱼类会受到复杂的外界环境胁迫作用，使得免疫力降低，造成台风过后鱼类大量死亡。虽然已经有了一些关于台风对鱼类生态影响的研究报道¨J，但目前对台风所引起的鱼类生理胁迫的主要响应机制尚缺乏了解，由于其因素复杂也无法在实验室内模拟。为

4、评价鱼类对环境胁迫压力的应激水平，大多研究者都以生物体内的一些皮质类激素变化作为指标。但这些指标指示单一，而且含量很低，一些非应激因子如生物个体的差异以及一些微小的非控条件的差异(投饵种类、采样方式等)，会掩盖这些指标变化的显著性水平，从而影响对胁迫机理的判断J。代谢组学是通过考察生物体系(细胞、组织或生物体)受刺激或扰动后，其代谢产物的变化或其随着时间的变化来研究生物体系的一门科学，它为复杂体系中主要的生物响应提供了新的手段。近年来，已有大量利用代谢组学研究手段研究人类和动植物对外部压力应急反应的报道¨”

5、，包括将此研究手段应用到鱼类生理、发育、疾病、养殖条件影响、污染物影响等方面研究¨，但是未见受到类似台风等综合外界环境胁迫下鱼类代谢组学研究报道。本研究采用此技术对2007年发生的超强台风“罗莎”影响区域内的网箱养殖大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)进行跟踪采样分析，以期从代谢组的角度分析鱼类在台风过程中产生的应急代谢物在台风过后恢复过程中的变化，为建立网箱鱼类台风应急措施、减少台风灾害造成的损失提供生理学依据。2实验部分2．1仪器与试剂ACQUITY超高效液相色谱(UPLC)分析系统，配置A

6、CQUITY自动进样器；Q—TOFPremier四极杆与飞行时间串联质谱仪(Q—TOFMS，美国Waters公司)。脂类标准品(纯度>99％，美国AvantiPolarLipids公司)；甲酸、异丙醇和乙腈(色谱纯)；亮脑啡肽(纯度>98％)及其它标准品均购于美国Sigma-Aldrich公司。纯水由超纯水系统(法国Millpore公司)制备。2009-08—16收稿；2010-02—11接受本文系教育部长江学者与创新团队项目(No．IRT0734)、宁波市自然科学基金(No．2009A610117)、宁波

7、大学学科项目(No．xkl09112)、国家科技支撑计划(No．2007BAD43B07)和宁波大学王宽诚幸福基金资助E—mail：yanxiaojun@nbu．edu．Oil分析化学第38卷2．2实验方法2．2．1样品采集和处理2007年10月7日16号超强台风“罗莎”过后，分别于10月9日、12日、1513和22日在浙江宁波象山港网箱养殖区的同一网箱内，采集7～10条一龄半外表健康的养殖大黄鱼，静脉抽血1mL，4℃放置3～4h，3000g离心10min，取血清在一80℃超低温冰箱中保存。血清解冻后，在3

8、00IxL血清中加入1000I,xL乙腈，旋涡振荡，4℃下放置10min，10000g离心，取上清液1100IxL旋转蒸发至体积不再变化，冷冻干燥。以1000L乙腈一水(4：1，V／V)复溶，进样5L进行UPLC／Q—TOFMS分析。每个样品重复进样3次。2．2．2色谱与质谱条件UPLC条件：ACQUITYUPLCBEHC8色谱柱(100mm×2．1mm，1．7m，美国Waters公司)，进样量5L，柱温50℃。