加压毛细管电色谱-激光诱导荧光法检测4种黄曲霉毒素.pdf

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1、第43卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2015年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1O63～1O68DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．150050加压毛细管电色谱一激光诱导荧光法检测4种黄曲霉毒素万青云茹鑫王晓曦王彦闫超¨，(上海交通大学药学院，上海200240)(上海通微分析技术有限公司，上海201203)摘要建立了三氟乙酸(TFA)柱前衍生，加压毛细管电色谱．激光诱导荧光(pCEC．LIF)快速测定黄曲霉毒素Bl、B2、Gl、G

2、2方法。使用粒径1．8m的c。毛细管色谱柱，以甲醇-水(45：55，V／V，含0．05％甲酸)为流动相，泵流速为0．05mL／min，分离电压为15kV，激发波长为375nm，发射波长为450nm，黄曲霉毒素B。，B2，Gl，G2达到基线分离。各组分的检出限(S／N=3)分别为0．02，0．016，0．008和0．O1g／L，在0．1—10g／L，0．1～10L，0．1～3．0g／L，0．1—3．0g／L范围内分别呈线性相关，相关系数分别为0．9999，1．0000，0．9995，0．9997。将本方法应用于花生酱

3、的分析，加标回收率在90．0％一112．O％之间，RSD在O．5％一1．9％之间。关键词加压毛细管电色谱；激光诱导荧光；黄曲霉毒素1引言黄曲霉毒素(Aflatoxin，AF)是由黄曲霉等产生的次生代谢物⋯，广泛存在于花生、玉米及其制品中，目前已发现20种之多，以B、B：、G。、G最为常见。研究表明，人食用被黄曲霉毒素污染的食品后，会引发肝癌和胃癌等疾病'4j。我国在国标GB27614011(食品中真菌毒素限量》中对其含量进行了严格的规定。目前，分析AFs的常规方法有薄层色谱法(TLC)J、酶联免疫吸附分析法(ELI

4、SA)、高效液相色谱法(HPLC)J。其中TLC法灵敏度和选择性不高；ELISA有交叉反应特性，且不能定性；HPLC法通常使用荧光检测器¨。或质谱检测[11,12]，试样耗费量大，分析时间较长。因此有必要发展一种更加适用于AFs检测的分析方法。加压毛细管电色谱(Pressurizedcapillaryelectroehromatography，pCEC)是近年发展起来的一种新兴微分离技术，具有高柱效、高选择性、高分辨度、快速分离、样品和试剂用量少的特点。pCEC已广泛应用于农残分析n、药物分析H]、食品检测J等领域

5、。目前，适用于pCEC的检测手段有紫外和质谱等，但缺乏一种痕量检测器，这在一定程度上制约了pCEC的应用。而激光诱导荧光检测器(Laser．inducedfluorescence，LIF)则以高灵敏度著称，检出限可达10一moVL_1，因此适用于与pCEC联用对AFs进行检测Ll引。本课题组通过自主研发LIF建立pCEC．LIF微分离平台，填补了该项技术空白，建立了一种新的黄曲霉毒素检测方法。本方法较传统方法具有更高灵敏度、更快速、样品消耗小等优势。虽然AFs在激光激发下可以产生荧光，但是为了增加AFB及AFG的荧

6、光强度，本研究使用了TFA将其氢氧化为AFB2和AFG：。衍生原理如图1。2实验部分2．1仪器与试剂半导体光纤激光器(上海Fiblaser科技有限公司)；ZT365bcm—UF1二向色镜、ET450／50m发射滤光片(ChromaTechnologyCorporation)；LD01-375／6激发滤光片(SemrockInc．)；C18毛细管色谱柱(150mmx100Ixmi．d．，1．8m，苏州环球色谱公司)；TGL一16G离心机(上海安亭科学仪器厂)；氮吹仪(上海安谱科学仪器公司)；Mycosep226多功能

7、净化柱(Romer国际贸易北京公司)。2015-O1—17收稿；2015-05-27接受本文系国家重大科学仪器设备可开发专项项目(No．2011YQ15007203)资助}E-mail：chaoyan@unimicrotech．tom1064分析化学第43卷AflatoxinG1AflatoxinAllatoxin图1黄曲霉素B-，G衍生反应式和B2，G2结构式Fig．1DerivatizationreactiontypeofaflatoxinB1，G1，andstructuresofB2，G2乙腈、甲醇、正己烷(

8、色谱纯，上海国药集团化学试剂有限公司)；甲酸、盐酸、三乙胺、醋酸铵(分析纯，上海国药集团化学试剂有限公司)；三氟乙酸(分析纯，上海安谱科学仪器公司)；水为二次蒸馏水。黄曲霉毒素对照品(混标，美国Supelco公司)。花生酱样品购自超市。2．2实验方法2．2．1柱前衍生条件取2mL净化液至棕色具塞瓶中，60℃水浴下氮气吹干。加人200正己烷和100LTFA衍生