与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50对血管内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响.pdf

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1、·200·中国心血管杂志2o14年6月第l9卷第3期ChinJCardiovascMed，June2014．V01．19．N0．3．基础研究．与膜一细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白5O对血管内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响冯智慧赵林刘晓华焦淑贤陈鹏【摘要】目的探讨与膜一细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50(EBPS0)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内Aktl磷酸化水平、细胞分泌明胶酶的活性以及细胞骨架表达和分布的影响，阐明其影响人血管内皮细胞增殖、迁移及成管的分子机制。方法构建EBP50

2、的真核重组表达载体，将重组质粒分别稳定转染HUVEC细胞系，经Westernblot法验证后，采用MTF法检测细胞的增殖活性：应用划痕法检钡4细胞的迁移能力：应用Matrigel法检测细胞的成管能力：应用Westernblot检测EBP50对Aktl磷酸化水平的影响：应用明胶酶谱法检测HUVEC细胞分泌的明胶酶活性；应用免疫荧光观察细胞骨架的分布。结果转染的外源性EBP50eDNA片段已整合到基因组中；与对照组细胞比较，EBP50能显著抑制细胞的增殖、迁移及成管能力。并且EBP50明显下调Aktl的

3、磷酸化水平(t=2．98．P<0．01)；同时使HUVEC分泌的MMP2活性下降，并影响血管内皮细胞内细胞骨架的分布。结论EBP50可以抑制HUVEC细胞的增殖、迁移及成管，其机制可能与调整Aktl的磷酸化水平、调节细胞分泌明胶酶的活性及影响微丝细胞骨架分布有关。【关键词】内皮细胞；细胞增殖；迁移；与膜一细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50Efectsofezrin·radixin-moesin-bindingphosphoprotein50onproliferation．migrationan

4、dvascularizationofhumanumbilicalveinendothelialcellsFengZhihui，ZhaoLin，LiuXiaohua，JiaoShuxian，ChenPeng．InstituteofTransfusionMedicine，QingDaoBloodCenter，Qingdao266071，China；2ShanDongEyeInstituteCorrespondingauthor：ZhaoLin，Email：qdhla@163．com_Thisworkwa

5、ssupportedbyagrantfromtheScienceandTechnologyPlanofQingdao(No．09一J一1-25一nsh)【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofezrin—radixin—moesin—bindingphosphoprotein50(EBP50)onthebiologicalpropertiesofhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC)andrelatedmechani

6、sms．MethodsThebiologicaleffectsofEBP50onHUVECwereinvestigated．WesternblottingwasusedtodetecttheexpressionofEBP50incells．The3-4，5-Dimethyl一2一thiazolyl-2，5-diphenyl一2H—tetrazoliumbromide(MTT)assayandscarificationtestwereusedtomeasuretheproliferationandmi

7、grationactivityofHUVEC．TheeffectofEBP50onthephosphorylationlevelsofAktlandthechangesofmatrixmetalloproteinase(MMP)一2andMMP一9levelsweredetectedbywesternblottingandgelatinzymographyanalysis．ResultsOverexpressionofexogenousEBP50inHUVECsignificantlyinhibit

8、edtheproliferation，migrationandtubefornlationofHUVEC．EBP50alsosignificantlydownregulatedAktlphosphorylationandthesecretionofMMP一2comparedwithcontrolcells．ConclusionsEBP50mightserveasapotentialtargetformanipulatingneovascularizationrelat