鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体识别表位的鉴定.pdf

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterIdentificationoftheEpitoperecognizedbymonoclonalantibodyofInfectiousBursalDiseaseVirusByQianqianWangSulAipingWangSupervisor：AlpmgZoologyDepartmentofBioengineeringMay2012原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位

2、论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：壬镛侑日期：)位年笞月30日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅：本人授权郑州大学可以将本学位论文

3、的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。．学位论文作者：王倩侑日期：乃b年s月扣日摘要传染性法氏囊病毒(mDV)会导致鸡发生严重的免疫抑制疾病，从而引起巨大的经济损失。自然条件下，IBDV广泛存在于周围环境中并且可以通过呼吸进行传播。IBDV感染的靶器官主要是法氏囊，会引起法氏囊肿大和出血等症状，使机体的免疫力下降，对其它病原因子

4、的抵抗力下降，从而继发感染多种疾病。IBDV抗原结合表位是病毒分子感染宿主细胞的主要部位，也是药物治疗的靶序列。如果能找到正确的病毒表位，在IBDV感染宿主之前，采取相应措施切断病毒的感染途径，就能起到很好的保护作用。本实验室根据已经报道的VP2蛋白的三维晶体结构，合成了VP2蛋白的五段序列，发现其中一条多肽P22可能是IBDV的抗原表位。方法本次实验将P22多肽进行了原核表达，发现其主要以包涵体形式存在。用镍柱纯化带His标签的P22多肽，纯化后的P22多肽放入透析袋中透析复性。SDS．PAGE检验多肽的纯化

5、程度，Westernblot检测P22多肽的特性。用IBD抗原快速检测试纸条验证Westernblot结果。15日龄的SPF鸡颈部皮下接种P22多肽，二免后取P22抗血清。琼脂扩散实验和中和效价测定P22抗血清的特异性和保护细胞能力。结果SDS．PAGE结果表明获得了比较纯的P22多肽。Westernblot结果表明P22多肽可以和IBDV单抗上清、IBDV标准阳性血清起特异反应，和IBDV阴性血清不反应。P22多肽可以与IBD快速检测试纸条发生特异反应，试纸条的控制线和检测线均显示红色条带。琼脂扩散实验显示P

6、22抗血清和IBDV强毒株可以形成明显的免疫沉淀线，IBDV强毒株和IBDV单抗上清之间也有清晰的免疫沉淀线。随机选择3份P22抗血清，在Vero细胞上检测中和效价，结果分别是1：640．1：650和l：620。结论P22是IBDVVP2蛋白上的抗原决定簇，P22是VP2的线性B细胞抗原表位。关键词：传染性法氏囊病毒；表位；单抗；多肽；VP2蛋白AbstractAbs仃actInfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)causesaneconomicallyimportant,immun

7、osuppressivediseaseinchickensandleadstOsevereeconomiclossesinthepoultryindustry．Underthenat-Hralconditions，IBDVexistsubiquitouslyandcaninfectchickensbytheoralroute．ThevirusdestroysthebursaofFabricius(BF)，causingsevereswellingandbleeding．IBDVleadstOseriousdam

8、agetootherimmuneorgansandceilsaswell嬲considerableeconomiclossesinpoultryindustries．TheepitopesofIBDValethemainpartsthatcombinethehostcellaswellasthetargetsequencesfordrugtherapy．Ifthecorrectepit