细胞工程全套配套课件 第三章 细胞工程实验室设置与基本技术.ppt

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1、第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第三章、细胞工程实验室设置与基本技术细胞工程是以离体细胞和组织的无菌操作为基础的实验性学科，它需要在模拟动．植物细胞生长发育而设置的实验条件和环境下进行一系列操作的。为此需要各种实验设施．设备．适宜的培养条件与技术。本章重点介绍细胞工程实验室的设置．主要仪器设备以及细胞工程的基本实验操作技术，这些是从事细胞工程工作的基础。第一节实验室设置第二节实验室主要仪器设备第三节细胞工程的基本操作技术第四节培养基的成分、配制与选择第五节培养条件的选择知识目标：了解细胞工程的通用技术熟悉实验室设置、仪器设备、器具

2、以其处理方法掌握培养基配制、培养条件的控制掌握灭菌以及无菌操作的原理与操作方法能力目标：掌握洗涤、灭菌和无菌操作技术（详见实训部分）会配制培养基（详见实训部分第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第一节实验室设置一、洗涤室二、灭菌室三、配制室四、无菌操作室(接种室)五、培养室六、鉴定室七、驯化移植室第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第一节实验室设置一、洗涤室用途：洗涤室主要用于玻璃器皿．用具和培养材料清洗配置:洗涤水槽、落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器二、灭菌室用途：用于培养基及培养器械的灭菌。配

3、置:配备实验台．高压灭菌锅．排风灭火设备．细菌过滤设备．干热消毒柜．电炉等。要求：设备的安装和排列要合理．房间要宽敞明亮．通风条件好，地面要便于清洁．防滑。第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第一节实验室设置三、配制室用途：配制室主要用于配置培养基。配置:：冰箱．天平．微波炉．pH计．培养基分装器．药品柜．器械柜．抽气泵．电炉．各种规格的培养瓶和用具．培养皿．移液管．烧杯．量筒．容量瓶．储藏瓶等。冰箱用于储存培养基母液．激素维生素等贵重药品．彩色胶卷．及保存植物材料。天平应有不同感量。第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第一节实验室设

4、置四、无菌操作室(接种室)用途：主要用于实验材料的接种操作配置:超净工作台或接种箱、固定式载物台、移动式载物台、广口瓶、酒精灯、纱布、器械支架、手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等。要求：无菌操作室在工作方便的前提下，宜小不宜大，宜精细密闭，忌粗陋放散，是植物组织培养研究或生产工作中最关键的部分，关系到培养物的污染率，接种工作效率等重要指标。第三章、细胞工程实验室设置与基本技术五、培养室用途：能控制光照和温度，防止微生物感染，对离体材料进行控制培养要求：应保持干燥和清洁。配置:培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器、摇床等。

5、六、鉴定室用途：对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求：清洁．明亮．干燥，配置:各种光学仪器七、驯化移植室用途：用于试管小植株的锻炼和移植。为试管苗提供满足生长的适宜环境条件配置:温室．弥雾装置．荫棚．移植床．钵．盆．塑料布．草炭．蛭石．粗沙等，第一节实验室设置第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第二节实验室主要仪器设备实验室主要仪器设备包括常规设备、灭菌设备、培养设备等。熟练掌握它们的结构、用途、使用方法及注意事项是顺利完成实验的重要保证。一、常规设备主要是用于试剂保存与称量、培养基配制与分装和水处理等。如天平、冰箱和冰柜、酸度计、离

6、心机、水纯化装置天平离心机第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第二节实验室主要仪器设备二、灭菌设备（一）高压蒸汽消毒装置培养基、蒸馏水、不含糖的缓冲液、培养器皿及其他用具等均需经过高压蒸汽消毒灭菌后方可使用。高压灭菌器时，一般在121℃，控温15～40分钟，既可切断电源，缓慢降压至读数为0时，方可取出灭菌物。（二）干燥灭菌器用于各种用具的灭菌。通常采用160～180℃持续90分钟来灭菌。（三）过滤除菌装置高压灭菌器滤器第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第二节实验室主要仪器设备二氧化碳培养箱养箱养箱倒置显微镜三、培养设备（一）培养设备

7、包括培养架．培养箱．摇床和生物反应器等。（二）倒置显微镜多用于隔瓶观察．记录外植体及悬浮培养物（细胞团．原生质体等）的生长情况。（三）双筒实体显微镜多用于剥离植物茎尖。第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第二节实验室主要仪器设备（四）细胞计数工具用作培养细胞的计数和活性的观察。（五）细胞冷冻保存装置普通的液氮容器常称为液氮罐。液氮温度约为-196℃，使用时要注意勿使液氮溅到皮肤上，以防冻伤。由于液氮不断挥发，应注意观察存留液氮情况，及时补充液氮，避免挥发过多而导致细胞受损。（六）其他仪器如磁力搅拌器．恒温水浴箱．振荡器．超声波清洗仪等

8、。冷冻装置第三章、细胞工程实验室设置与基本技术第二节实验室主要仪器设备主要金属器材四、培养容器与用具（一）接种用具用途：主要用于接种外植体．解剖动物．取材和原代培养中切割组织。消毒方法采用高压蒸汽消毒或采用70％酒精浸泡