分子指纹技术.doc

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1、遗传HERETDIASeig1（）4-39（in）2：414Bj609•综述・DA指纹技术中所用的探针及其发展N刘树俊程光潮（科学院中国遗传研究所北京11100）0P0eue•1DAnePitgcnuadeDv1mnrbsdNFgrr•1Th•1eTieepetsninneqnhr0LiSuuujnChnGuncahegagh0(stt0GntscdmaiBig11IteeecAae1Scei10)n1uf1,■1a•J0nn01概述10wa和Whe9年，yn端分群其高8mi描述了t第一个多等位性的具有高度多态性的人类DA标记（）N

2、・不久，在胰岛素基因（slgn）5iune'nie的区域、致癌基因cHr1oee3—asocgn）,an的阖别发现了相同的高度可变的标记（Praa1mfe•在，对蛋白（gb）周围还发现了herbakryvie）一a1i基因一on它三个标记（•12B1（证实：29年，e等，）81）这些度多态性区域申联着重复的短序列单位，由于重复单位数冃的差异导致了这种高度的可变性.正是由于这些结构特征，人们称这些区域为小卫星（nst1emiaei）i1t或高度可变区域（yeaib）hprr1或可变数冃的中联重复（divdevr—dbnmeotdmet

3、・5Jfeslubraera）1年，er等首先将从人肌红蛋白位点（ygb1u所获得的3b核efnes9p8fymolioson）c3p心序列作为探针对个体进行研究，建立了DA指纹图谱技术（•尔后，N4）这一技术迅速在动植物的进化关系、亲缘关系分析及法医学方面得到广泛应用•正由-TDNA指纱技术在核酸分析中显示出强大的生命力，因而许多学者围绕此技术所用的探针作了大量的丁•作.除Jfy等（的探针外，ers9fe＞用人工化学合成或从生物组织中提取后再扩增的办法生产出了一批高水平的探针.迄在DA指纹技所用的今，N术中探针大概有pb313.M

4、re・，o353,6bcrPaMIO,iretenp,B2p1(Totng1(T)(A)aeohgPetVceP750G)nin1GsCC5tie32gi18G,Pio3ycai8G/.,(A/)(T,同在GCAaG）等，时，探针的标记上也有了T及（a很大的发展.2探针家族21小卫星探针和简单重复序列探针・冃前使用的探针，根拯它们的结构可大致分为两类：小卫星探针和简单重复序列探针.其中第二类包括：微卫星探针（coaeipoemist1eb）r1r和寡聚核昔酸探针•它们都是由比较短的串联的t重复序列组成，应用于DNA指纹分析时，都呈现

5、广泛的个休特异性和高度多态性（见图1）・尽管两大类探针在许多生物特性上相似，但也存在许多差别：（从结讲，们基组成的不同小卫探1构上它木单位长度・星针的核序）心列为3b,卫针在12p3p星探则00Z微一b间，寡核0酸探针在lb：0p以下；2在染色体上的分布不一样•高度可变的小卫星常定位在人常染色体前的末端（）（rtmia区域，pocn1r）而简单重复序列探针（（I微卫星）则普遍散布在人类整条染色体上，或者在基因间区域或者位于内含子内•近年来对动物进行了研究，基本与人相似；3具体使用时，（）各自所需的条件不一，且同样的DNA用同样的酶切

6、，两大类探针杂交，带谱不一（见图1）•2期刘树俊等：指纹技术中所用的探针及其发展41CATTLESHEEPPULTRY0!ahcd}{ch—一1cd}ahc门百图1儿种不相关个体的DA指纹图谱，N分别用4种探针进行杂交（）’aJfes；R・c（劝ld（T）.er3.bll.2.G5fy36.8；G；G2.2放射性探针和非放射性探针探针在使用Z前必须进行标记,根据标记物的不同，可将探针分为放射性探针和非放射性探针两类.冃前，・在多数实验室采用的是3争标记.3既可在5也可在32P端，'端标记，也可用缺口平移法将用3标记的2P核普酸到探去

7、•’标探针度高背较浅能得清度较高谱尤掺人针中用2记的灵敏，景比，获晰P的图，其在法医学上能提供更为精确可靠的生物学证据.但由2标记的探针对人体有害，于3P探针的稳定性较差（P3半衰2期只有}3,4未）：乂需耍特殊的仪器，整个操作过程比较复杂，，所以人们将用生物素（o门或类固srd标记bt）ii醇（eito）的探针引人了DA指纹技术,2标记的探针相比，N与用3P它们有如下特点：（对无害非常定，保存卜1人体，稳可）儿年时=）测方单，需特仪器（通间’（检法简无殊的；）过缺口移‘23平法，将用生物素标记的TPT或UP掺入到DA中的方法已被改

8、进，而可用单拷贝的探针去检测限制性片段长度TN因多态性（FP,但是，RL）不可能用生物素标记的核普酸去合成寡核普酸，因为生物素内含物使探针变得不稳定.解决的办法是，加一个或少数儿个生物素分子到寡核昔酸的3'甚至单一个生物素分子（'就可