中图版生物选修3第二节《植物组织培养》教案.doc

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1、植物组织培养在《生物技术实践》模块课稈标准中，植物纟R织培养的具体要求是“尝试植物的纟R织培养”。尝试是技能性目标屮的模仿水平，即学生仿照教师的示范性动作完成对实验对象的操作。植物组织培养是一项操作复杂而精细，操作难度较大的实践活动，其操作流稈包括：配制母液、培养基配制与火菌、外植体选择和消毒、接种、形成愈伤组织、诱导丛芽和生根、组培苗移栽等操作环节。从操作的持续时河看，完成前四项活动需要一天，示三项活动需要1〜2个月。为了确保在有限的时间内顺利地开展实验教学，需要确定学生动手操作的一些重要环节和步骤，并针对这些环节和步骤提前做好实验准备。1实验室

2、的准备工作木实验需要作好三项实验准备：一是提前配制备种母液；二是提前准备MS培养基；三是选择外植体并进行预处理。1.1配制母液母液屮含有大量元素、微量元素、激素（植物生物调节剂）和维生素等有机成分，母液浓度是实际溶液浓度的5〜10倍。配制母液花费时间多，需要用到溶量瓶、移液管等精密仪器，无法由每位学生亲白操作，教师可带领部分学生在课外进行。母液的类型和配制顺序如下：MS大量元素㈡母液的配制MS徴霾元素<母液的配制QFe盐母液的配制有机物母、液的配制Q植物生长调节剤母液的配制恥制母液的注意事项：⑴白来水或河水屮含有大量的矿质元索，勿用配制母液；⑵配制

3、人量元素和微量元素母液时，应将每种化合物单独溶解麻，再一一混合，同时还应用适量的蒸幅水清洗烧杯内壁，并将淸洗示的蒸镭水倒入混合溶液屮，这样可以保证每种元素的浓度，混合时要按照教材附表屮的顺序进行，最麻加入的是氯化钙溶液，这样可以避免发生沉淀；⑶配制好的母液要先倒入1000ml烧杯屮，再由烧杯转入1000ml细口瓶屮，不可由容量瓶直接倒入细I」瓶屮；⑷注意观察母液屮是否有絮状物，出现絮状物表明离子Z间发生反应,需要重新配制母液；⑸植物生长调节剂难溶丁水，需要碱或酸助溶，一般生长素类物质川碱（0.1mol/LNaOHl〜3ml）或酒精（75〜95%的酒

4、精1〜血1）助溶，细胞分裂素类物质一般用酸（0.1mol/LHCLl〜3ml）助溶，加入蒸馆水定溶时要缓慢，也可用水浴法助溶；⑹用棕色细II瓶盛装有机物母液和植物工长调节剂母液，避免透射光损害母液小的有机成分;⑺在瓶壁上贴好各种母液的标签（下图所示人⑻将配制好的母液放入冰箱屮或阴凉处保存。MS大量元素母液MS微量元素母液MS铁盐母液i有机物母液荼乙酸（NAA）j100m]/L10ml/LlOOml/L110ml/L50mg/100ml

5、■200x年x月x曰20A年x月x日200x年x月x日

6、200汉年x月x曰200江年x月江曰1MS是穆拉希吉（Mu

7、rashige）和斯库克（Skoog）两位科学家第一•个字母的缩写，他们于1962年为培养烟草而设计了一种培养基，这就是组培使用中最为广泛的MS培养基；标签屮间一行的数字及单位表示的意义如下，例如,100ml/L,即配制1升培养基只需从母液屮提取100ml即可;50mg/100ml,表明100ml母液中含有50mg荼乙酸,如取4mg的荼乙酸，只需提取8ml母液。除母液需提前配制好外，消毒液也需要提前配制好。外植体消毒一般采用75%的酒精、2〜10%的次氯酸钠溶液等。1.2培养基的配制与灭菌培养基的类型有很多种，通常采用MS培养基。配制培养基的流程如

8、下:蔗穗F■

9、琼j旨►灭菌一＞备用上述的培养基配制流稈屮，加入各种母液的时间是在琼脂溶化Z后，这样既可避免加热使母液屮的各种离了发生反应，又可避免有机物母液和植物生长调节剂因高温受到损害。将母液加入培养基的顺序是：先提取大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，示提取植物生长调节剂母液，切勿先提取植物生长调节剂母液，这是因为该溶液屮含有酸或碱，容易与其他元索形成沉淀而失败。培养基通常采用高压蒸汽灭菌，灭菌时问一般为15〜20min,灭好菌的培养基不易保存过长时间，通常是现用现配。在对培养基火菌的同时，也要对解剖刀、辍子、烧杯、锥形瓶、牛皮纸等必要的仪器

10、设备进行灭菌。1.3外植体的选择和预处理根据植物细胞的全能性原理，选择任何活的植物体都能培养出组培苗，但不同植物的务种组织和器官的分裂能力不同，同时还要考虑消毒处理的特殊情况，I大1此，选择恰当的外植体进行接种既有利于消毒，避免污染，又冇利于在较短时间内形成组培苗，从而提高组培成功率。下面是选择外植体时需要考虑的一些因素及说明。考虑的因素说明外植体的年龄一般情况外植体的年龄越小，分化的程度越小，组培的成功率就越高，因此，尽最选择幼嫩的植物组织或器官作为外植体外植体的大小夕卜#1体很小和很大都不合适，很小的外#1体极容易死仁很大的外#1体不容易消毒,

11、因此，要选择大小适中的外植体。例如，如果用菊花的芽进行组培,选取的芽口］为3inm左右外植体所在的部位一般选择植物的芽尖、