EM菌定向培养(共享).doc

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1、EM菌定向培养i•光合细菌（1）培养基:1)酵母膏3g/L蛋白月东3g/LCaCl20.3g/LMgSO40.5g/LPH白然（保存用）2)酵母膏0」g/LNH4C11.0g/LNaAC3.5g/LMgCl20」g/LCaC120.1g/LKH2PO40.6g/LK2HPO40.4g/LPH7.2（富集用）3)NaAC2g/LNaHCO31g/LNH4C11g/LNaC11g/LKH2PO40.5g/LK2HPO40.2g/LMgSO40.2g/LCaCl20.01g/L蛋白豚ig/L酵母膏0.3g

2、/LPH7.2-7.6（分离纯化用）（2）定向培养:1）富集培养:10mL/15X150mm试管,EM菌0.5mL石蜡封面。28°C-30°C7-14天（10天）连续光照（1000-30001x）,60v灯泡距离30-40cm.颜色由浅呈桃红至棕红色。重复一至二次，取富集液0.在相同条件下定向富集.2）分离纯化：梯度稀释：10"、Q5、10・MRS培养基蛋白腺10.0g、牛肉膏10.0g.酵母膏5.0g、柠檬酸氢二钱2.0g、A双琼脂平板培养.半固体保存半固体混菌挑单菌落划线典型单菌落10mL71

3、5X150mm试管静置2-3h穿刺接种混匀•表面封无菌石蜡注入上层半固体琼脂（0.8%）同样条件下连续光照28°C-30°C7-10天连续光照7~10天备用颜色由浅至棕红色28°C-30°C7-10天EM菌屮光合细菌平板培养，25-28°CPH6.5-7.68・14天种类多菌落较大。2.乳酸菌（一株浅黄边缘整齐，另一株灰白色边缘不整齐）（1）培养基：1)牛肉膏10g/L蛋白豚10g/L酵母膏10g/L番茄汁20%葡萄糖lOg/L吐温0.05%CaCO320g/L澳甲酚绿0.01%PH6.0-6.52

4、)酵母膏7.5g/L匍萄糖10g/L番茄汁100mL蛋白豚7.5g/LKH2PO42.0g/L吐温0.5mLPH6.0-6.53)葡萄糖20g/L酵母膏10g/LPH6.0-6.54)蛋白8-10g/L酵母膏3-5g/L葡萄糖13・15g/LKH2PO41.5-2.0g/LMgSO40.3-0.5g/LMnSO40.2-0.25g/LNaAC3.0-5.0g/LPH5.5-6.55)蛋白月东0.8-1.0g/L糖蜜3.0-5.0g/L酵母膏3-5g/L玉米浆0.5-l.Og/LKH2PO.3g/LM

5、gSO40.3-0.5g/LNaCl3-5g/L葡萄糖8-lOg/LPH5.5-6.5(发酵或种了培养基)葡萄糖20.0g、吐温801.0mL、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锈0.25g、琼脂18.0g、蒸憎水IL,pH6.5O（分离培养基），当MRS培养基冷却至45〜5（TC时，加入已灭菌的碳酸钙，充分混匀，倒平板。（2）定向培养:1）富集培养：150mL/250mL三角瓶密封培养，Em菌3%,30°C-35°C静置四天，重复一次,取富集液5mL在相同条件下培养.经验结

6、论：二天0D值增长快，PH值6.0-6.5迅速降至3.0-3.5,四天趋于平缓，随后逐渐上升，第六夭稳定在PH7.0左右.镜检大量杆（棒）状乳酸菌，菌体较大，还有少量椭圆酵母，一股酸甜气味3.酵母菌：（乳白色或红色，粘稠发亮呈圆或椭圆黄瓜状，表面光滑，边缘報齐。液体培养基2）分离纯化：平板划线或混菌取一环单菌转接斜面梯度稀释—►典型菌落落梯度稀释——►30°C-35°C混菌或涂布（快大）(10106)24h(1010_10'6)不同菌落混菌培养30°C-35°C30°C-35°C24-48H2

7、4-48H生长生成沉淀或菌）（1）培养基:1）麦芽汁培养基1：4水60-659水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤。10・15波林PH6.0-6.42）马铃薯200g（煮沸过滤补到1L）3)葡萄糖100g/L蛋白腺7g/L迅4)葡萄糖50g/L尿素Ig/LNa2HPO40.5g/LMgSO41g/L拉红0.03g/LPH4.5-5.0定向培养葡萄糖20g/LPH4.5-6.0(自然)酵母膏7g/LKH2PO41g/LMgSO40.5PH6.5(

8、NH4)2SO41g/LKH2PO42.5g/LFeSO40.1g/L酵母膏().5g/L孟加(富集用)1）富集培养：l（K）mL/500mL三角瓶，EM菌3%,28°C-30°C,150-200r/min三至四天，菌液混浊，产菌膜并有少量沉淀，重复一次，取富集液3-5讥相同条件下培养.经验结论：生长快，三天0D值达顶峰，卩只由5.5降至3.5-3.0.镜检酵母细胞多，逐渐粘在一起，呈卵圆或椭圆形。2）分离纯化梯度稀释►平板划线或混菌一►转接斜面10_10咗、106