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《儿童门静脉海绵样变性脾静脉中NFκB、VEGF表达及意义.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、儿童门静脉海绵样变性脾静脉中NFkB、VEGF表达及意义【摘要】目的研究门静脉海绵样变性患者脾静脉NFkB、VEGF的表达，以探讨门静脉海绵样变性巨脾的形成机制。方法取7例门静脉海绵样变性患者脾静脉石蜡切片作为实验组，8例车祸伤脾脏挫裂伤脾静脉石蜡切片作为对照组，通过免疫组化测定NFkB、VEGF的表达，t检验检验两者差异有统计学意义。结果实验组脾静脉NFkB、VEGF阳性颗粒明显多于对照组，半定量测定实验组的表达量高于对照组，两者差异有统计学意义(P<0.05)o结论门静脉海绵样变性血管病变及巨脾形成可能与
2、NFkB、VEGF有关。【关键词】门静脉海绵样变性；核转录因子kB;血管内皮生长因子；脾静脉TheexpressionandsignificanceofNFkBandVEGFinthesplenicveinofcavernoustransformationofportalveinofchildrensMAOJianxiong,LIULei,WANGBin,etal.DepartmentofGeneralSurgery,ShenzhenCityChildrensHospital,Shenzhen518026,C
3、hina[Abstract]ObjectiveToresearchportalveincavernoustransformationofsplenicveininpatientswithNFkB,VEGFexpression,toexploretheformingmechanismofportalveincavernoustransformationofsplenomegaly.Methods7casesofportalveindegenerationinpatientswithsplenicveinpara
4、ffinsectionsasanexperimentalgroup,eightcasesoftrafficaccidentinthespleencontusionandlacerationofthesplenicveinparaffinsectionsasacontrolgroup,thedeterminationofNFkB,VEGFexpressionbyimmunohistochemistry,thettesttestsignificantdifferencebetweenthetwo•省略门静脉海绵样
5、变性(cavernoustransfromationofportalvein.CTPV)是儿童比较少见的疾病，但近年来随着影像学诊断技术的进步，诊断率逐渐提高。门静脉海绵样变性患儿肝功能多无异常，主要表现为肝前性门静脉高压，消化道出血是其主要的症状及死亡原因，脾脏增大及脾功能亢进是本病的特征之一。本研究通过测定患者脾脏中NFKB及VEGF的表达探讨CTPV患者脾脏增大的机制。1资料与方法1.1一般资料取2000年2月至2007年3月期间确诊门静脉海绵样变性并行分流术患者脾静脉石蜡切片7例作为实验组；对照组取车
6、祸伤脾挫裂伤行脾切除患者脾静脉石蜡切片8例，脾切除前无脾脏方面的病变。1.2实验试剂兔多抗NFKBp65抗体，鼠单抗VEGF（lgG）抗体，兔超敏二步法免疫组化试剂盒，鼠超敏二步法免疫组化试剂盒，浓缩型DAB试剂盒，均购自北京中杉金桥公司。1.3实验仪器石蜡切片机LEICARM2135（Leica公司）,显微镜DMLB30（Leica公司）,显微镜成像系统（高通公司），隔水式恒温培养箱GNP9160（上海精宏实验设备有限公司），电子干燥箱LG050B,APES载玻片（北京中杉金桥公司），微波炉（Panason
7、ic）o1.4实验方法1.4.1免疫组化步骤石蜡切片脱蜡至水，PBS冲洗，浸>z<泡于含3%H2O2去离子水10min,将切片放入枸椽酸盐缓冲液中，微波炉内加热，使容器内液体温度达到在929〜98°C之间并维持10-15mine取出容器，室温中冷却10-20minoPBS冲洗,滴加VEGF（或NFKBp651:100）-抗抗体，于湿盒内49过夜孵育。PBS冲洗，分别滴加试剂1,室温孵育20min,PBS冲洗，滴加试剂2,室温孵育20min,PBS冲洗，用DAB显色，显微镜下控制显色时间，自来水冲洗终止显色，苏
8、木素复染，约2min,自来水充分洗涤，浸于1%盐酸酒精分化，自来水充分洗涤。70%、80%、90%酒精脱水;无水酒精I、无水酒精II脱水。二甲苯I、二甲苯II透明，中性树胶封片。1.4.2NFkB及VEGF结果判定于400倍高倍光镜下进行判定，NFkB阳性颗粒位于细胞核或细胞浆，为棕黄色染色，VEGF阳性颗粒位于细胞浆，为棕黄色染色。NFkappaBp65表达的测定：由于NFKB活化后进入细胞核，因
