《微生物的实验室培养》教案.doc

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1、《微生物的实验室培养》教案专题2微生物的实验室培养一、培养基的种类、营养和配制方法1•培养基按照可分为液体培养基和固体培养基。在液体培养基屮加入凝固剂一后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成——的。2.各种培养基一般都含有水、—源、—源和无机盐四种营养物质。满足微生物生长还需要适宜的（培养霉菌时需要将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至—或—性）、氧气的耍求（根据微生物的需求提供有氧或无氧环境）、—物质（如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加等）。3.制作牛肉膏蛋白月东固体培养基⑴方法步骤：、称

2、量、溶化、、。（2）倒平板操作的步骤：%1将灭过菌的培养皿放在的桌面上，右手拿装冇培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶，将迅速通过火焰。%1用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10~20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。%1等待平板,大约需5〜lOmin。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。【拓展】1、生物的营养碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。女口、NaHCO3等无机碳源；、蛋白质、脂肪等冇机碳源。异养微生物只能利用冇机碳源。单质碳不能作为

3、碳源。氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、N0・、NH4、蛋白质、氨基酸等。只有才能利用N2。2.确定培养基制作是否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温1〜2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。二、无菌技术2•获得纯净培养物的关键是防止外来的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的、操作者的和进行和o②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行O③为避免周围环境中微生物的污染，应在酒精灯附近进行。1④实验操作吋应避免处理的材料用具与的物品相接触。2.消毒与灭菌的区别

4、消毒指使用较为的或方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体—的微生物（不包括和）。消毒方法常用消毒法，还有化学药剂（如酒精、氯气、、等）消毒、消毒。灭菌则是指使用的理化因素杀死物体内外的微生物，包括和0灭菌方法冇灭菌、灭菌、灭菌。【拓展】1.2.倒平板无菌操作的注意事项(2)瓶口通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基O(2)(3)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在1UL盖与1111底之间的培养基上滋生，最好不要用这个平板培养微生物。(4)(5)(4)平板划线与系列稀释的无菌操

5、作要求：操作的各。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。三、纯化大肠杆菌以及菌种的保藏1.纯化大肠杆菌(1)微生物接种的方法最常用的是法和法O(1)平板划线法是通过在琼脂固体培养基表面的操作。(2)稀释涂布平板法是将进行一系列的稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到培养基的表面，进行培养。分为和两步。(3)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物成单个，从而能在培养基形成单个的O(4)平板划线法操作步骤：%1将接种环放在火焰上，直到接种环O%1在

6、火焰旁接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞。%1将通过火焰。%1将的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。%1将通过火焰，并塞上棉塞。%1左手将1UL盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条,盖上皿盖。注意不要划破。%1灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板放入培养箱中培养。(5)涂布平板操作的步骤：%1将浸在盛有酒精的烧杯中。%1取菌液(不超过O.lmL),滴加到培养基表面。%1将沾有少量酒精的涂布器在

7、火焰上，待酒精后，—冷却_8〜10s。2%1用涂布器将菌液地涂布在培养基表面。1.菌种的保存(1)对于频繁使用的菌种，可以采用—保藏的方法。%1临时保藏方法…将菌种接种到试管的固体上，在的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入的冰箱中保藏。以后每个月,都要重新将菌种从旧的培养基上到新鲜的培养基上。%1缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易或产生0⑵对于需耍保存的菌种，可以采用管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装入lmL甘油后。将ImL培养的菌液转移到甘汕瓶中，与甘油充分混匀后，放在的冷冻箱中保存。【拓展】1.2.污染。【习题

8、】K临床试用抗生素前，冇时需要做细菌耐药实验。实验吋，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用法或法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。（2）取该单菌落适当稀释，用法接种于固体培养基表面，在