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1、第28卷第3期水生生物学报Vol.28,No.32004年5月ACTAHYDROBIOLOGICASINICAMay,2004适合大量培养的红球藻藻种的筛选张宝玉李夜光耿亚红李中奎胡鸿钧(中国科学院武汉植物所,武汉430074)摘要:研究了4个雨生红球藻(Haematococcuspluvialis)品系在10℃、15℃、20℃、25℃和28℃时的生长速率(μ)、生物量、虾青素含量和产量,从中选出适合于大量培养的品系H.pluvialis26和H.pluvialisWZ。2个品系的虾青素含量和产量分别达到2.41%—3.16%,46151—54135mg/L和2140%—21
2、59%,39184—40115mg/L。2个品系的温度适应具有互补性:H.pluvalisWZ适应于较低温度(10℃—20℃),H.pluvialis26适应于较高温度(20℃—28℃),在低温季节使用H.pluvialisWZ,在高温季节使用H.pluvialis26进行生产,可以延长生产期,提高产量。关键词:雨生红球藻;虾青素;大量培养;藻种筛选中图分类号:Q949.29文献标识码:A文章编号:100023207(2004)0320289205雨生红球藻(HaematococcuspluvialisFlotow)是一1材料与方法类生活在淡水中的单细胞绿藻,该藻在它的孢子(
3、Cysts)中能积累一种经济价值很高的虾青素111藻种与培养基H.pluvialis26;H.pluvialis30;[1—2](Astaxanthin)及其酯类。随着研究的深入,虾青H.pluvialis34;H.pluvialisWZ用改良的BG211培素的功能越来越引起人们的兴趣。一方面,由于其养,由本所经济微藻室藻种库提供。优异的着色效果及对鱼、家禽等生长促进作用而被112培养方法将处于对数生长期的藻液密度调[3—5]4广泛用于饲料添加剂。另一方面,作为优越的为0.5—1×10个/mL。50mL的三角瓶放25mL藻天然抗氧化剂,其抗氧化性优于β-胡萝卜素、维生液,设置
4、一个重复组,置于摇床上,摇床上设定特定[6—8]素E,被称为“超级维生素E”,而被广泛开发应的温度。摇床转速为100r/min。连续光照,光照强2用于食品、医药、化妆品等行业的生产。虾青素具有度为50μmol/m/s。每隔24h取样,加Lougul’s固定广阔的应用前景,而如何获得大量虾青素已成为液固定,用血球计数板在显微镜下计数,每一个样品[9—12]国际上研究的热点之一。根据目前的文献报计数4次,取平均值。共培养5d。[13]道,虾青素的来源主要有:化学合成;从甲壳类动113生长速率(μ)的计算计算公式:[14]物中提取;利用真菌生产及利用微藻生产。研究LnN2-LnN1
5、μ=表明,在自然界中雨生红球藻孢子的虾青素含量T2-T1最高。N2是时间T2时的细胞密度,N1是时间T1时但大规模培养红球藻生产虾青素存在以下几方的细胞密度。面技术问题:1.易被其他微藻,变形虫,原生动物污114生物量(鲜重)的计算在显微镜下测量细胞染[15];2.红球藻普遍适应低温,一般超过28℃就抑原生质体的直径,用球体积公式计算原生质体,根据制其生长;3.生长较慢;4.虾青素含量仍然偏低。因细胞密度和细胞体积,按细胞比重为1.0计算单位此筛选出温度适应范围广,生长快,虾青素含量高的体积藻液中藻的生物量(鲜重)。藻种是解决上述问题的关键。作者对4株雨生红球115鲜藻中虾青
6、素含量的测定根据Boussiba等[16]1%藻进行了筛选,以期选出适合大规模生产的藻种。的方法提取和测定虾青素,按消光系数A1cm=收稿日期:2003205228;修订日期:2003210206基金项目:国家自然科学基金:中国孢子植物志,团藻目(I)(编号:39899400)作者简介:张宝玉(1975—)女,山东诸城人,硕士通讯作者:李夜光,yeguang@rose.whiob.ac.cn290水生生物学报28卷[17]2220计算虾青素的浓度。静孢子。藻液颜色不象20℃时那样浓绿,而是淡黄(1)用下列公式计算所测溶液中虾青素的浓度:色。10℃时基本不生长。A4921%C1
7、=1%(g/mL)(A1cm=2220)A1cm×100(2)用下列公式计算鲜藻中虾青素的含量:C1×v×nC2=×100%Wv———提取液体积(单位:ml)n———稀释倍数W———取样质量(单位:g)2结果2114个雨生红球藻品系在不同温度的生长情况4个雨生红球藻品系在不同温度下培养的生长曲线见图1,生长速率见表1。H.pluvialis26温度适应范围较广。在15℃—28℃范围内都可以生长,最适生长温度是20℃。20℃时,不仅生长繁殖快,细胞形态也好,藻液颜色浓绿。28℃时,细胞生长繁殖仍较快,但培
