冬虫夏草的培养.doc

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1、冬虫夏草的培养冬虫夏草是真菌，它主要寄生于活动的昆虫体内进行有机质的分解碳源、氮源和无机盐内等营养物质。人工栽培时必须合理地配制这［医源世界vww.39kf.com］类营养成份，才能满足它的生长要求。现筛选了以下几种最适宜冬虫夏草菌丝生长的原料及配方如下：一、母种制作培养基配方：1、马玲薯200克（煮汁）、窗萄糖20克、琼脂20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、蛋白腺1克、牛肉膏0.5克、水1000mlo2、蛋白豚1克、葡萄糖20克、酵母膏1克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、VB11克、VB121克、琼脂20克、水1000mlo3、豆芽500克（丸汁）、白糖20克、琼脂20克、磷酸二氢钾1

2、克、硫酸镁1克、蛋片腺0.5克、水1000mlo将上述配方任选一组，按其它母种制作常规方法操作,分装于180x18试管的1/5,高压灭菌1.5磅维持30分钟，制成斜面培养基备用。接种：待斜面培养基表面余水干后，放入无菌接种箱内接种，将分离的纯冬虫夏草母种挑取黄豆大一块放入斜血培养基上，每支母种可接10-15支，但母种的传代不超过二次，否则失去感染力。培养：接种后，放置15~18°C条件下恒温培养。三天后菌丝开始萌发，淡黄色而吐盛的绒毛团菌丝向四周蔓廷，七天左右菌丝表面可产生了廉（即草），这种草虽然没有虫的寄主，它的营养成份与冬虫夏草完全一致，正常情况下10天左右菌丝可长满斜面培养基。二

3、、液体种制作培养基配方：1＞米汤（大米煮至半熟过滤）500ml、葡萄糖5克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、蛋白腺1克、牛肉膏1克、VB11克、VB121克。2、面汤（煮血条后的汤）500ml、白糖5克、蛋白豚1克、牛肉膏1克、硫酸镁1克、酵母膏1克、磷酸二氢钾1克。3、清泉水500"、衙萄糖10克、蛋刨东2克、牛肉膏2克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁2克、VB12克.VB122克。将配好的营养液装入500ml的三角瓶内，每瓶装150ml,瓶口塞上棉塞，高压灭菌1.5磅30分钟。接种培养：冷却后，放入接种箱内无菌操作，将母种培养基取手指头大一块放入液体瓶屮，每支母种可接5・10瓶，置20-25°

4、C条件下先静置培养三天，然后再同样温度下放入摇床振动培养，若没有摇床，每天把液体瓶用手摇3・5次，每次3・5分钟，经过10・15天的培养即成为液体种。如果栽培量大，液体种不够的情况下，应根据生产量还可将液体种扩制液体种Z3次（级），无论哪级液体种都可用于真接栽培冬虫夏草，但母种或液体种传代过多会影响效果。液体种不宜存放时间过长，一般在低温或避光条件下不超过一个［医源世界E39kf.com］月使用效果较好，最好是在栽培季节前制作液体种。检验液体种是否培养成功：方法是经过10・15天恒温和振动培养，从色泽上看没有明显变化，只有在停止振动三天示，液体表面逐渐出现黄白色菌丝，无任何界色现彖，可

5、证明液体种已培养成功，随着时间长久液体表面形成一层很厚的菌皮，在栽培使川时必须去掉表面这层过厚的菌皮利川淸液。三、固体菌种制作冬虫夏草的栽培一般是使用液体菌种，固体菌种还可以试测虫草了座能否生长，也可以用固体培养基或PDA培养基直接栽出虫草，它在大米等固体培养基上或桑蚕上部能长出了座，在适宜的昆虫体上喷入液体种就能长出冬虫夏草。培养基配方1、将大米用水煮至半生过滤，装入罐头瓶内，用牛皮纸或數料薄膜封口灭菌。2、活玉米或活小麦直接装入罐头瓶内（若干品必须浸泡12小时以上）封口灭菌。3、棉壳95%、米粉3%、黄豆粉2%.含水量60%,装瓶灭菌。在1.5磅压力下60分钟，或常压灭菌100°C

6、保持5・6小时，冷却接种。接种：在接种箱内无菌操作，无论固体母种或液体种都可接入固体培养基。母种可挑取培养基手指头大一块放在固体培养基表血，也可以用接种针沾取菌丝在固体培养基中搅拌均匀。液体种接种是将种液渗入固体培养基屮摇匀，每瓶用种量不超过5ml。培养：固体种需在15~18°C的暗光条件下培养，用液体种接的只需15-20天菌丝可长满瓶，用固体母种接的需要一个月时间菌丝才能长满瓶。