氧化亚铁硫杆菌的分离纯化和生长特性研究.pdf

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1、第32卷第3期铀矿冶Vo1．32No．32013年8月URANIUMMININGANDMETALLURGYAug．2013氧化亚铁硫杆菌的分离纯化和生长特性研究王永东，李广悦，彭国文(南华大学铀矿冶生物技术国防重点学科实验室，湖南衡阳421001)摘要：采用平板分离技术分离、纯化得到氧化亚铁硫杆菌，并对其中5株菌株开展生长特性研究。结果表明：2：2固体培养基是一种较好的能用于分离、纯化氧化亚铁硫杆菌的培养基；氧化亚铁硫杆菌在培养基的初始pH为2．O～2．5时生长速度最快，最佳生长温度为30℃，初始p(Fe-。)为4．623g／L，适宜的接种量为lO％。各菌株的生长特性存在一定

2、差异。关键词：氧化亚铁硫杆菌；固体培养基；分离；纯化；生长特性；差异性中图分类号：TD853．37文献标志码：A文章编号：1000—8063(2013)03—0148—06氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillusferroox—社)；GSP一9080MBE恒温培养箱(上海一恒科学idans)是一种重要的浸矿微生物，能应用于铀仪器有限公司)；SI一300R空气浴摇床(韩国杰奥矿、金矿、铜矿、锌矿等矿石的浸出h-s]。这种细菌特有限公司)；过滤除菌器(1L，杭州翔盛气体设可以通过氧化二价铁和还原硫获得生长、扩增所需备有限公司)；SW—CJ一1FD洁净工作台(江苏安泰的能

3、量，同时产生三价铁、硫酸等物质浸出金属。空气技术有限公司)；S20pH计(瑞士梅特勒一托氧化亚铁硫杆菌浸矿可以增快浸出速率、提高浸出利多集团)；SH23—2磁力搅拌器(上海梅颖浦仪器率、降低生产成本，同时还可以减少环境污染。仪表制造有限公司)。氧化亚铁硫杆菌采用9K培养基分离时，存1．2试剂与样品在菌落生长时间长、背景呈铁锈色、不利观察和分1)试剂。(NH)2SO、KC1、KzHPO、离等现象。鉴于此，笔者采用2：2固体培养基分Ca(NO3)2、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、离、纯化得到了氧化亚铁硫杆菌单克隆菌，并选取CaC12、Na2S2O3·5H2O、KH2

4、PO4、H2SO4、5株不同来源的氧化亚铁硫杆菌进行了生长特性NaOH、琼脂等，均为分析纯。研究，为指导氧化亚铁硫杆菌的选育提供参考。2)样品。按照无菌操作程序从衡阳柏坊铜矿、衡阳水口山矿务局和745矿取得氧化亚铁硫1材料与方法杆菌分离所需样品。1．1主要仪器设备1．3培养基CL-32L高压灭菌器(日本三洋电机株式会1)液体培养基。9K培养基，其组成见表1。表19K培养基组成g2)固体培养基。2：2培养基，分别配制A～D4部分2：2固体培养基，其组成及灭菌方法见收稿日期：2013-03-22基金项目：湖南省自然科学基金重点项目(1OJJ2O33)；国家自然科学基金资助项目(1

5、1205084)；湖南省自然科学基金项目(13JJ3O77)作者简介：王永东(198O一)，男，硕士，讲师，主要从事铀矿冶生物技术研究。通信作者：李广悦(197O一)，男，博士，教授，主要从事铀矿冶生物技术研究。E-mail：lgy673@163．corn第3期王永东，等：氧化亚铁硫杆茵的分离纯化和生长特性研究149表2。当C液、D液冷却至45℃时混合，然后再混入A液和B液，最终pH为4．6～4．8。表24部分2。2固体培养基的组成和配制1．4试验方法后镜检发现视野下有较多行动活跃的氧化亚铁硫1)氧化亚铁硫杆菌的富集。取10mL水样杆菌。或土样浸泡液于盛有90mL的9K培养基

6、的锥2)分离与纯化。在固体培养基上培养至第7形瓶中，将锥形瓶放在转速为200r／min、温度为d可以看到培养皿上有针尖大小的菌落，到第153O℃的空气浴摇床里振摇培养，直至锥形瓶中的d可以看到平板上出现圆形黄色菌落，直径约0．5培养基颜色由淡绿色变为红色。取1OmL富集mm，呈较不规则圆形。氧化亚铁硫杆菌在2：2液按上述培养条件，再次进行富集，共富集3次。培养基上出现菌落需要的时间为7d，比9K培养2)氧化亚铁硫杆菌的分离和纯化。取100基缩短1O余天[6]，并且背景接近白色，菌落为淡L富集后菌液加入到2：2固体培养基上，再用黄色，区分较明显，菌落数量多，几乎铺满平板。灭菌的

7、涂菌器将菌液涂布均匀。将培养皿正置于2．2氧化亚铁硫杆菌生长特性研究3O℃恒温培养箱中，3h后再倒置培养。待菌落2．2．1pH对氧化亚铁硫杆菌生长活性的影响长出后，挑取形态规则，大小适中的单个菌落转到保持其他条件不变，调整培养基的初始pH液体培养基中，置3O℃水浴摇床中培养。转速设分别为1．0、2．0、2．5、3．0、3．5，考察pH对氧化置为200r／min。培养基颜色由淡绿色变为红色亚铁硫杆菌生长的影响，结果见图1。时结束培养。由图1可知：5株氧化亚铁硫杆菌在pH为3)氧化亚铁硫杆菌生长特性研究。挑