工程菌的培养.doc

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1、一、工程菌的培养一、实验冃的学习工程菌的培养技术二、实验原理工程菌的保藏一般采用甘油法，它是工程菌常用的方法之一。工程菌在低温条件下保藏一段时间后，其活性会降低。因此，工程菌在使用吋需要重新活化培养，一般是取少量的日油菌活化后划线培养，待平板丄长出单菌落，挑取单菌落接种至液体培养基上，即得到可使用的工程菌。三、实验仪器及菌种1、三角瓶、无菌超净工作台、培养箱、酒精灯、枪头等2、含有H的基因质粒的大肠杆菌甘油菌(含质粒PUCI8)四、实验步骤1、培养基的配制LB液体培养基：蛋白月东10g/L,酵母提取物5g/L,NaCL5g/L,PH=7.0LB固体培养基：蛋白月东10g/L,

2、酵母提取物5g/L,NaCL5g/L,琼脂16g/L,PH=7.02、培养基及器材的灭菌将培养基、枪头、三角瓶、培养皿等放入高压灭菌锅屮I2I°C,灭菌20mino3、无菌超净工作台的灭菌打开无菌超净工作台，紫外灯灭菌30mino4、甘油菌的活化将I「油菌接入附加有抗生素(Kan50mg/L)的液体培养基屮，在恒温培养箱屮振荡中37°C培养12-16ho5、菌种的划线培养将培养过夜的菌液，用接种环接种至固体培养基，37°C培养12-16ho6、菌种的扩大培养用牙签或者枪头挑取-单菌落接入液体培养基耳•,在恒温培养箱屮振荡11137°C培养12-16ho五、思考题1、在培养基屮

3、加入抗生素的作用是什么？2、本实验屮操作应注意的事项是什么？