吸附百日咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂制造及检定规程.doc

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1、吸附百日咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂制造及检定规程本品系由右日咳菌苗原液、精制白喉类毒索及精制破伤风类毒索用氢氧化铝吸附制成。供儿童预防百日咳、白喉及破伤风之用。1抗原要求1.1百日咳菌苗原液应符合附录1《白日咳菌苗原液制造及检定耍求》中2.4项的规定。1.2精制白喉类毒素应符合《吸附精制白喉类毒素制造及检定规程》屮4项的耍求。1.3精制破伤风类毒素应符合《吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程》屮4项的要求。2制造2.1配方每ml制剂中各种抗原成份含量如下：白口咳菌45亿〜90亿精制白喉类毒索20Lf精制破伤风类毒索5Lf

2、2.2吸附剂配制，见《吸附精制破伤风类毒索制造及检定规程》5项。2.3氢氧化铝稀释以蒸憎水按吸附后Z总量将氧氧化铝原液稀释成1.0〜1.5mg/mlo硫柳汞含量不超过0.01%(g/ml),氯化钠含量补足至0.85%(g/ml),高压蒸汽灭菌。2.4吸附按计算量将精制白喉类毒索、精制破伤风类索及右日咳菌苗原液加入稀释好的吸附剂内。调节pH至5.8〜7.2。同批吸附剂同批配合的原液同次吸附的制品为1批。如用大罐吸附时，所用抗原和吸附剂可以多批混合(精制类毒素不超过3批)，每罐为1批。3成品检定3.1物理化学检查3.1.1振摇后应

3、呈均匀乳白色混悬液。不应有摇不散的凝块或异物。3.1.2pII值应为5.8〜7.2。3.1.3氯化钠含量为0.75%〜0.9%(g/ml)。3.1.4硫柳汞含量为1.0%〜0.5%(mg/ml)。3.1.5硫柳汞含量不超过0.01%(g/ml)o3.2鉴别试验抽取样品，另枸椽酸钠或用具他适宜方法将吸附剂溶解后，离心沉淀百日咳菌体和残留的吸附剂，按《吸附精制白喉类毒素制造及检定规程》中7.6项、《吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程》中7.6项和附录1《白日咳菌苗原液制造及检定要求》中2.4.3项进行鉴别试验。3.3无菌试验按《生

4、物制品无菌试验规程》进行。3.4毒性试验应符合附录1《白H咳菌苗原液制造及检定耍求》中2.4.5项的规定。3.5安全试验3.5.1小白鼠法用体重18〜20gZ健康小白鼠5只，每只皮下注射检品0・5ml观察7日，不得有局部脓肿或死亡。3.5.2豚鼠法用体得300〜400g豚鼠,每批制品不少于4只,每只皮下注射2.5ml,分两侧，每侧1.25ml,应符合《吸附精制白喉类毒索制造及检定规程》中4.4项及《吸附精制破伤风类壽索制造及检定规程》中4.5项要求。3.6.1白Fl咳菌苗免疫力试验每3批抽1批进行，丿应符合附录1《白日咳菌苗原

5、液制造及检定耍求》中1.2.5项的规定。3.6.2白喉及破伤风类毒素的效力试验每更换1批类毒素时进行。取体重300〜400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml,第30天采血，将分离的血清等量混合，进行白喉及破伤风抗毒索单位测定。3.6.2.1白喉抗毒索单位测定用Lt/300家兔皮内法，要求每ml血清达到0.25IUo3.6.2.2破伤风抗毒索单位测定用L+/100小白鼠皮下法，要求每ml血清达到0.5IUO3.6.2.3白喉类毒索的效力试验亦可采用攻毒法。取体重300〜350g豚鼠5只以上，每只皮下注射0.5ml。第30天各皮下

6、攻击白喉毒素200个MLD,观察7天，豚鼠死亡不得超过20%；同时另取体重240〜270g豚鼠3只，齐皮下注射1个MLD毒素作为对照，2只对照豚鼠应发病并于96小时内死亡，允许另1只较晚死亡或发病。3.6.2.4亦可按WII0推荐的效力检定方法（见《吸附精制白喉类毒素制造及检定规程》附录和《吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程》附录）。4保存与效期应保存于2〜8C。自吸附Z曰起效期为1年半。附录1百日咳菌苗原液制造及检定要本品系用白日咳第I相菌种经培育后取菌体制成悬液，加适当杀菌剂，以磷酸盐缓冲生理盐水稀習制成，每ml含菌45亿

7、〜90亿。用丁•制备白口咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂。1.1制造白口咳菌苗Z菌种、检定用的I相诊断血清、白口咳分型血清及白日咳参考菌苗，由中国药品生物制品检定所分发或经同意。1.2.1培养特性丁•包-姜(Bordet-Gengou)氏或其他适宜的培养基上培育，各菌株应具有典型的形态及生化特性。1.2.2血清学特性将35〜37°C培育40〜48小吋的菌苔，混悬丁生理盐水或磷酸盐缓冲生理盐水内，使每ml含菌20亿个，与I相血清做定量凝集反应，凝集效价应达到血清原效价Z半。同时与单价分型血清做定量凝集反应，其型别应与该菌种标定

8、型别相同。1.2.3皮肤坏死试验用健康家兔或豚鼠至少2只，用培育40〜48小时的菌苔混悬丁磷酸盐缓冲生理盐水内，然后稀释为儿个不同浓度的菌液，分别用每一稀释度的菌液注射于家兔或豚鼠的皮内0.lml,经72小时观察反应。如2只家兔或豚鼠屮有1只注射0.4亿个菌以下的菌液部位出现