生物制药技术教学（复旦大学）生物制药技术粗略梳理.doc

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1、酶工程•分离纯化酶的一般程序•酶层析技术的基本原理•固定化酶的定义•固定化酶的方法•酶生物传感器抗体工程制药•多克隆抗体、单克隆抗体的定义和区别•单克隆抗体的制备流程以及两种大量制备的方法•基因工程抗体的主耍类型（概念为主）动物细胞工程制药•生产用动物细胞的种类•常用转基因方法的基本原理疫苗及其制备技术•疫苗的类型与特点（概念为主）新型生物制药技术•反义技术、反义核酸药物的定义•核酶的定义和作用机制•RNA干扰的定义、小干扰RNA的定义•RNA干扰的作用机制•基因治疗的两种导入方式：invivo；e

2、xvivo•肿瘤的基因治疗（记大条目）基因工程部分复习题1基因工程及其要素2同尾酶和同裂酶的区别答：同尾酶是来源与识别顺序均不同，只是切割后产生相同的黏性末端；同裂酶的来源不同,识别顺序相同，但切割位点不同，切割后产生粘性或平头末端。4载体概念及必要构件5基因组文库及应用6cDNA文库概念构建及特征7克隆载体和表达载体的区别8聚合酶的功能及共性答:功能：在体外以DNA或RNA为模版，催化DNA或RNA的合成共性：需要引物和模版；不能起始新的DNA链，催化dNTP连续加到双链DNA分子引物链3-OH

3、端；不发生从引物模版上解离。9taqDNA聚合酶和pfuDNA聚合酶的共同点及不同点，应用时注意哪些问题？答：（1）相同点：两者都具有DNA聚合活性；都可用于PCR反应（2）不同点：taq酶有逆转录酶活性而pfu没有；taq有3,■亍的外切酶活性，pfu有5VT酶活性，产物为平末端；taq酶耐热性好；taq酶易突变，而pfu酶具有高保真性；taq酶依赖于mg2+（3）注意：由于taq酶具有一种模版依赖的末端转移酶活性，在使用taq酶扩增dna时常导致末端3,端突出一个未配对的核昔酸Ao10彫响DNA

4、连接的因素11穿梭载体的特点及在基因工程操作中的意义12表达载体必须具备的条件答：13提高平末端DNA连接效率的策略14重组DNA导入受体常用的方法15融合蛋白及非融合蛋白的概念16利用慕因工程技术制备药物设计思路及制备过程17PCR原理及反应要点20重组菌筛选及鉴定方法21重组DNA鉴定方法22基因工程重组蛋白的鉴定方法23基因工程蛋白药物常用的修饰方法24影响目的基因在大肠杆菌小表达的因索发酵工程复习思考•叙述发酵工程制药的特点。1、众多反应在发酵设备中一次完成。2、反应条件温和，设备简单。3、

5、微生物需为纯种状态。4、培养基和设备预先灭菌。5、发酵过程保持无杂菌污染。6、有生长期和生产期两个不同阶段。7、易产生复杂的高分子化合物。8、理论产量很难从物料平衡计算。9、产生结构类似的组分或副产物，需提取、分离、精制等。2.叙述影响发酵过程供氧、需氧方而的因素。学会通过图例分析。供氧方而:（1）搅拌：•把空气泡打散成小气泡，增加气液接触面和接触时间;•搅拌使液体产生径向运动，形成涡流；•形成湍流断面，减少气泡周围液膜的厚度；•除去细胞的C（）2和代谢物，保持菌丝体及营养物于均匀的悬浮状态。（2）

6、空气流量发酵液黏度：影响影响氧的迁移和CO2扩散（4）微生物生长的影响（5）泡沫的影响：液态泡沫影响气体的交换和传递需氧方面：(1)微生物种类和生长阶段：从菌体的生产阶段看：菌体生长阶段的摄氧率大于产物合成期的扌（2）培养基的组成：菌丝的呼吸强度与培养基的碳源有关，葡萄糖的培养基表现较高的摄氧率（3）培养条件：温度高则生长速率快耗氧多；PH适宜则生长速率快耗氧多（4）CO2浓度的影响：因而发酵过程中如不及时将培养液中的CO2从发酵液中除去,势必影响菌体的呼吸，进而影响菌体的代谢活动3.如何从自然界中

7、获得发酵制药所需要的微生物？可举例。4.理想发酵用菌种的要求？如何获得理想的发酵菌种。5.菌种保藏的原理及要素。6.叙述微生物的营养要素。其中重点了解碳源、氮源。能举例说明。7.叙述迟效性、速效性碳源氮源的概念及意义。8.发酵工程中如何配置一个合适的即能满足微生物生长乂能满足代谢产物形成的培养基。9.试叙述发酵生产的一般过程。10.叙述种子扩大培养的冃的及种子制备的一般过程。11.接种量、接种龄的概念。12.种子的质量标准及影响种子质量的因素。13.种子质量的控制措施及如何进行种子有无染菌的检查。1

8、4.发酵过程的中间分析项日及如何通过对这些项日的分析达到发酵的目的。15.发酵过程影响温度变化的因素，及如何控制发酵温度？16.发酵过程影响pH变化的因素，及pH对发酵的影响以及如何调节发酵过程的pH。17.泡沫对发酵的影响及如何消泡？18.发酵过稈补料的有关概念。