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《新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、新城疫冻干疫苗生产工艺流程1生产用毒种制备1.1毒种繁殖将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。1.2毒种鉴定1.2.1病毒含量按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-93个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前
2、死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160(微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。1.2.2纯净应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。1.3毒种保存在-15℃以下保存,应不超过1年。1.4毒种继代应不超过3代。2制苗材料选择选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。3
3、制苗用毒液的制备3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。3.2孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。3.3收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。收获后的胚液置于灭菌瓶中，作好标识，留样后，结冻保存。在收获胚液的同时,应逐个检查鸡胚
4、,如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用。4半成品检验4.1无菌检验经处理过的胚液,每组分别取样,按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行无菌检验,应无细菌生长。4.2病毒含量测定按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-93个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160(微量法1:128)者判
5、为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量>107EID50者可用于配制疫苗。5配苗及分装将检验合格的若干组鸡胚液滤过,混合于同一容器内,按规定羽份,加一定比例的蔗糖脱脂奶粉作稳定剂,使其最终蔗糖含量为2.5%，脱脂奶粉含量为5%，同时加入适宜的抗生素,充分摇匀,定量分装,每羽份病毒含量应≥106EID50。分装后迅速进行冷冻真空干燥。6成品检验6.1物理性状6.1.1外观检查疫苗瓶上的标签，打印出的羽份或头份、生产批号、有效日期清晰可见、位置适当。瓶上的铝盖稳固不松动。6.1.2眼观检查将疫苗拿到与眼平行位置观察呈微黄色，海绵状疏松团块，然后再轻微振动，疫苗松动并与瓶壁分离，判为合格。6
6、.1.3溶解性检查用稀释液注射到疫苗瓶内，经轻微振动，疫苗应迅速完全溶解，无粘块或粘团出现，判为溶解性良好。6.2无菌检验按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行，如有菌生长，应进行杂菌计数，并作病原性鉴定（按《杂菌计数和病原性鉴定操作细则》进行）和禽沙门氏菌检验每羽份非病原菌数应不超过1个（按《禽沙门氏菌检验法》进行）。6.3支原体检验按《支原体检验法》进行，应无支原体生长。6.4鉴别检验6.4.1选择发育良好的10日龄SPF鸡胚10只，划出尿囊腔接种部位。6.4.2将疫苗用无菌生理盐水稀释至105.0EID50/0.1mL，与等量抗鸡新城疫病毒特异性血清混合，室温中和1小时后，尿囊腔接种
7、，每胚0.1mL。6.4.3将接种后鸡胚用石蜡封孔后，置37℃继续孵育，观察120小时，在24~120小时内应不引起特异死亡，且至少存活8只，鸡胚液作红细胞凝集试验，应为阴性。6.5外源病毒检验按《外源病毒检验法》进行。6.6安全检验下列方法任择其一。6.6.1用鸡胚检验将疫苗用无菌生理盐水稀释，尿囊腔内接种10日龄鸡胚10只，每胚0.1ml（含10个使用剂量），接种后24~72小时，鸡胚死亡率应不超过20%
