铝敏化依诺沙星荧光显微成像体系性质及其应用研究.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2010年7月ChineseJouma

2、ofAnal~icalChemistry973～978DOI110．3724／SP．J．1096．2010．00973铝敏化依诺沙星荧光显微成像体系性质及其应用研究杨乐王红刘颖(中央民族大学生命与环境科学学院，北京100081)。(内蒙古师范大学化学与环境科学学院，呼和浩特010022)摘要应用毛细流自组装成环荧光显微成像技术，建立了铝敏化依诺沙星的测定方法，并实测了不同样品中依诺沙星的浓度。在NH一NHC1缓冲介

3、质(pH9．7)和聚乙烯醇(PVA一124)存在下，A1”一ENX复合物液滴在疏水性玻璃表面上受热挥发形成直径约为1．63mm，环线宽约为50m的自组装环。当点样体积为0．20／xL，其线性范围1．00×10～5．00×10tool／ring(5．00×10～～2．50×10mol／L)，检出限为7．65×10mol／ring(3．83×10molfL)。本方法用于葡萄糖酸依诺沙星注射液中依诺沙星含量和牛奶中依诺沙星残留量的检测，回收率分别为96．9％～107．0％和94．2％～102．5％，相对标准偏差(R

4、SD)分别小于4．1％和2．4％。实测了健康志愿者服用依诺沙星胶囊后尿液中依诺沙星的平均浓度及兔子灌喂依诺沙星后血清中药物平均浓度，均得到了较满意的结果。关键词荧光显微成像技术；铝敏化依诺沙星；牛奶；人体尿液；兔子血清1引言依诺沙星(Enoxacin，ENX，图1)是第三代喹诺酮类广谱抗菌药，1一乙基一6一氟一1，4-二氢_4一氧代_7一(．哌嗪基)一1，8．萘啶．3一羧酸倍半水合物，它是利用拮抗DNA旋转酶，从而阻断DNA的复制而起到快速杀菌作用⋯，在临床上被广泛应用于治疗因敏感菌导致泌尿系统、肠道、呼吸系

5、统、外科、妇科、五官科及皮肤科等感染性疾病J。目前，检测喹诺酮类抗生素残留量的方法主要有微生物检测法J、毛细管电泳法HJ、酶联免疫法J、电化学法J、色谱法"’剐和荧光分析法l9等。毛细流自组装荧光显微成像技术是一种新兴的检测喹诺酮类药物残留的方法。因为在自组装过程中液滴中的溶质能够在环线上聚集，相当于对样品进行预浓缩，且需要样品量极少，因此它具有测定灵敏度高、共存物质干扰小、适用于微量分析检出限低等优点。SOR(Serf-orderedring)荧光显微成像分析法用于药物分析的研究中，例如盐酸小檗碱¨、四环素

6、[1I1和硫酸奎尼丁纠等。但此技术应用于测定依诺沙星含量未见报道。本实验建立了铝敏化依诺沙星荧光体系，并应用于依诺沙星注射剂中依诺沙星含量和牛奶中残留依诺沙星含量的检测，测定了健康人服用依诺沙星胶囊后尿液中依诺沙星的平均浓度及兔子灌喂依诺沙星后血液中药物平均浓度，均得到了较满意的结果。对于食品中抗生素残留量的测定和药物药代动力学研究具有参考意义。2实验部分2．1仪器与试剂Ix一81倒置荧光显微镜(日本Olympus公司)，选用u激发单元，激发滤光片波长范围330～385nm；CCD配套采图软件DPContro

7、ller(日本Olympus公司)；Image—ProPlus中文版6．0(美国MediaCybernetics公司)图像处理软件获取SOR荧光图像；Origin7．5软件用于线性、高斯拟合等相关分析；800B低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂，最高转速：4000r／min)；微量进样器(上海安亭微量进样器厂，规格：1IxL，5)；格兰仕微波炉(佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司)；GL一88B型旋涡混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限责任公司)；PB．10酸度计(德国赛多利斯公司)；BS224S型电2009

8、—11-22收稿；2010-03-01接受本文系国家自然科学基金(No．20767004)、中央民族大学“985工程”项目(No．MUC985)、中央民族大学“2l1工程”项目(No．MUC021211306)、中央民族大学引进人才启动基金、内蒙古自治区自然科学基金重点项目(No．200711020202)、内蒙古自治区高等学校科学研究项目(No．NJ06108)资助E—mail：liuying430@yhoo．con．cn974第38卷子天平(德国赛多利斯公司)；BDVacutainer真空采血管(英国Be

9、lliver工业产业公司，规格5mL)；参照文献[1O]自N-氯二甲基硅烷处理疏水性载玻片。依诺沙星(中国药品生物制品检定所，对照品，质量分数91．1％)：称取0．O080g依诺沙星于小烧杯中，加适量5％乙酸溶解，用三次蒸馏水定容于250mL容量瓶，配成1．0×10mol／L的储备液，避光保存于0—4oC冰箱中，用时稀释成1．0×10mol／L工作液；NH3．NH4C1缓冲溶液(pH9．7)；1％(