基于核酸适体的新型液晶生物传感用于检测血小板源性生长因子BB.pdf

《基于核酸适体的新型液晶生物传感用于检测血小板源性生长因子BB.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第42卷分析化学rFENXIUUAXUE)研究报告第5期2014年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry629—635DOI：10．3724／SP．J．1096．2014．31090基于核酸适体的新型液晶生物传感用于检测血小板源性生长因子BB李霞谭慧李云磊吴朝阳沈国励俞汝勤(湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室，化学化工学院，长沙410082)摘要利用核酸适体与其靶分子具有高度特异性结合的原理，建立了基于液晶取向改变的以核酸适体为捕获探针用于检测血小板源性生长因子BB(Platelet—derivedgrowthfactorBB

2、，PDGF—BB)分子的新型液晶生物传感方法。核酸适体通过戊二醛偶联固定在3一氨丙基三乙氧基硅烷／N，Ⅳ_二甲基一Ⅳ．十八烷基[3·(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵[(3-Aminopropy1)trimethoxysilane／N，N-dimethyl—N-octadecyl(3-aminopropy1)trimethoxysilylchloride，APTES／DMOAP]混合自组装的传感基底表面，当靶分子PDGF—BB存在时，可与核酸适体发生特异性作用结合于传感基底表面，根据生物分子的空间尺寸效应能诱导液晶分子取向发生变化，从而引起光学信号的亮度和色彩发生改变，实现对

3、PDGF—BB的快速检测。本方法具有操作简单、选择型好、灵敏度高的特点，在PDGF—BB浓度为5nmol／L时仍可观察到明显的光学信号变化。关键词核酸适体；血小板源性生长因子BB；液晶生物传感；自组装膜1引言液晶生物传感是基于液晶分子在功能膜表面排列取向发生变化，改变液晶分子对光线的折射能力，将界面上产生的反应变化信息转换成光学信号变化，实现对目标物的检测¨I2J。与传统的分析检测方法相比，液晶生物传感无需采用外源性标记物修饰，在自然光下就能进行检测，所呈现的光学信号可用肉眼观察，具有操作简单、响应快速、易于实现微型化和阵列化等特点，使其在生命科学、临床医学和环境研究上

4、具有广泛的应用前景。蛋白质作为机体细胞的重要组成部分，是人体组织更新和修补的主要原料。它对调节生理功能，维持新陈代谢都起着重要作用。因此，蛋白质检测是目前临床诊断以及化学与生物研究上的一个重要课题。本研究基于大分子物质，特别是蛋白质分子的空间尺寸效应能有效干扰液晶分子有序排列的原理’，以核酸适体为捕获探针建立了基于液晶取向改变的新型液晶生物传感方法用于检测血小板源性生长因子BB(Platelet—derivedgrowthfactorBB，PDGF—BB)。PDGF-BB作为人体血小板中含有的一种促进细胞有丝分裂、趋化活性的生长因子，在正常细胞中含量较少，但在一些人类肿

5、瘤细胞中却常常发生基因过表达，是癌症诊断中的一种标志物，因此发展对其灵敏的检测方法引起了人们很大的兴趣。本研究结合液晶生物传感的优点，建立了一种无需标记、操作简单、选择性好、成本低，响应快速的液晶生物传感检测PDGF．BB的方法。2实验部分2．1仪器与试剂NikonEclipse50iPOL偏光显微镜(尼康公司)；MD50显微镜照相机装置(广州市明美光电技术有限公司)；F7000荧光分光光度计(Et立公司)。实验所用核酸适体由上海生工有限公司合成。重组人血小板源性生长因子BB(Platelet—derivedgrowthfactorBB，PDGF—BB)、牛血红蛋白(B

6、ovinehemoglobin，BHb)、牛血清蛋白(Bovineserumalbu—rain，BSA)、凝血酶(Thrombin)、N，N一二甲基．Ⅳ一十八烷基[3一(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵(N，N—dime一2013—11-l2收稿；2014-01-ll接受本文系国家自然科学基金项目(Nos．21175037，21277042，J1210040)和湖南省科研条件创新专项重点项目(No．2011TI'IO04)资助E—mail：zywu@hnu．edu．ell630分析化学第42卷thyl-N—octadecyl(3-aminopropy1)trimethoxys

7、ilylchloride，DMOAP)、3一氨丙基三乙氧基硅烷[(3-Aminopro．py1)trimethoxysilane，APTES)、氰基硼氢化钠(NaBH3CN)以及戊二醛，均购自美国Sigma—Aldrich公司；SYBRGreenI(SG)核酸染料(北京鼎国试剂公司)；4一腈基4一戊基联苯液晶(4-eyano-4'-pentylbiphenyl，5CB，石家庄斯迪亚诺精细化工有限公司)；载玻片(扬州三月玻璃制品有限公司)；Mylar聚酯薄膜(厚度20m，广州舒歌电子有限公司)；实验室所用水为超纯水(电阻不小于18．3Mn)