基于适体的荧光纳米生物传感器用于内毒素的检测

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1、万方数据现代检验医学杂志第25卷第2期2010年3月JModLabMed，V01．25，No．2，March．201031基于适体的荧光纳米生物传感器用于内毒素的检测欧艺，姚朗(南方医科大学公共卫生与热带医学学院毒理系，广州510515)摘要：目的利用SELEX技术筛选出来的核酸适配体与脂多糖的高亲和力来对脂多糖进行定量定性分析。方法以脂多糖的两条核酸适配体与鹰多糖的结合构建三明治结构。再利用磁性纳米的磁性分离技术，设计并制作一种新型的荧光纳米生物传感器，用其检测腊多糖．结果荧光数值随着脂多糖剂量的升高而升高，两者呈线性关系，潮定线性范围为0．0312～4EU／ml，线性方程为△

2、F=8．4708C+6．6796(C单位为EU／m1)，相关系数为0．9960。检出限为0．024EU／ml，且测得的荧光信号稳定，24h后测定并无衰减。结论在选用磁珠作为基因载体的基础上，运用核酸适配体与目标蛋白的强亲和力的三明治结构来检测内毒素的方法具有很高的检测特异性扣灵敏度．关键词：核酸适配体；脂多糖；磁性纳米；荧光中图分类号：R392—33文献标志码：A文章编号：1671—7414(2010)02—031—03doi：10．3969／j．issn．1671—7414．2010．02．011DetectionofBacteriaiEndotoxinwithaNano—Bi

3、osensorBasedonAptamerFluorescenceOUYi，YAOLang(DepartmentofToxicology，SchoolofPublicHealthandTropicalMedicine，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China)Abstract：ObjectiveThelipopolysaccharidewasanalyzedquantitativelyandqualitativelybasedonitshighaffinitywiththeaptamerscreenedbytheSELEXte

4、chnology．MethodsTwoaptamerandiipopolysaccharidewereconstructedtOasandwichstructure．Thenewtypefluorescencenano—biosensorwasdesignedaccordingtOmagneticseparationtechniqueofthemagneticnanoparticlesfordetectionofthelipopolysaccharide．ResultsThefluorescencevaluesincreasedathigherdosesoflipopolysac

5、charideandtherelationshipbetweenvariableswaslinear．ThelinearrangeofdeterminationWaS0．0312～4EU／ml，thelinearequation△F=8．4708C+6．6796(C，EU／m1)，thecorrelationcoefficient0．9960，andthedetectionlimit0．024EU／m1．Thefluorescencesignalwasstablewithoutattenuationafterbeingdetectedin24hours．ConclusionIti

6、sofhighspecificityandsensitivitytOdetectlipopolysaccharideusingthehighaffinitysandwichstructureconstructedbyaptamerswiththeoftargetproteinbaSedonmagneticbeadsasagenevector．Keywords：aptamer；lipopolysaccharide；magneticnanoparticles；fluorescence感染性疾病是世界十大致命疾病之一，尤其是非发达国家儿童和外伤病人在此类疾病中死亡率较高n]。在感染性疾

7、病中又以革兰氏阴性菌(gram—negativebacteria，GNB)感染败血症、内毒素血症及其休克的临床死亡率最高。脂多糖(1ipopolysac—charide，LPS)即内毒素(endotoxin)是GNB外膜的主要成分，由类脂A核心寡聚糖和0一特异性多糖侧链三部分组成，在GNB外膜渗透性和流动性的维持及致病过程中起主要作用[2]，因此检测LPS具有重要的医学意义【3]。近年来，适体(aptamer)作为一种分子识别元件，越来越受到关注。适体是通过指数级富集的配基系统进