基于冠心病心肌缺血血瘀证小型猪血清核磁共振代谢组学的研究.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE1研究简报第8期2011年8，L』ChineseJournalofAnalyticalChemistryl274～l278基于冠心病心肌缺血血瘀证小型猪血清核磁共振代谢组学的研究王勇李中峰陈建新啜文静李春郭淑贞赵慧辉王伟王英锋(北京巾医药大学药理教研室，北京100029)(首都师范大学化学系，北京100037)摘要通过左冠状动脉前降支放置Ameriod环制备冠心病慢性心肌缺血动物模型，并结合冠脉造影等厅法确立中医m瘀证证候，采用现代核磁共振(NMR)和模式识别技术，分析冠心病心肌缺血血瘀证模型与假手术组小型猪

2、4星期血清的共振氢谱，及相应代谢物谱群的变化，开展中医血瘀证候学的研究。结果示，陔疗法制备的模型4星期后确立为稳定的冠心病慢性心肌缺血JnL瘀证模型，PCA方法清晰地将模型组与假手术组动物分别，m清HNMR谱的主成分分析(PCA)、两组动物代谢谱各相同。似手术组与模型绀比较发现，血清中内源性代谢物柠檬酸、肌酸、7L氨基丁酸、乳酸、肉碱、葡萄糖等含量f升，低密度脂蛋白(LDL)极低密度脂蚩h(VLDL)等脂质代谢物的浓度下降。町见，在血瘀证早期糖代谢与脂类代谢紊乱，两者互为冈果，导致能量代谢中羧酸循环(TCA)平衡的破坏，最终加重并恶化了冠心病血瘀证

3、的进程．这些代谢物的特征组合模式町成为临床诊断与防治冠心病血瘀证的诊疗指标。关键词冠心柄；咀瘀证；核磁共振；代谢组学l引言冠心病心肌缺血在世界范围内的发病率与死亡率高居首位J，目前主要依靠症状体征与心电图的改变、冠脉造影作诊断，花费大，不易开展，并且有创口1。对其相关生物标记物研究尚缺乏特异性指标1。代埘组学是对生物体内所有代谢物进行分析，并寻找代i身}物与生理病理变化相对关系的研究方法。相关技术的发展使筛查与诊断冠心病，寻找其生物标记物成为可能】。曰前，代谢组学检测技术包括核磁共振技术(Nuclearmagneticresonance，NMR)和

4、基于质谱的技术。其中NMR具有不破坏样品的结构和性质、检测无偏向性等特点，更适用于生物样品的检测，具有良好的临床应用前景J。×寸冠心病心肌缺血的研究多基于大鼠急性结扎所致的心梗或心衰模型，不符合临床慢性心肌缺血的发病过程。小型猪作为心肌缺血的动物模型，在心血管形态学、生理学方面与人类最为接近1，Ameroid环吸收体液可均匀收缩致冠脉进行性狭窄，更符合冠心病慢性心肌缺血临床发展变化的全过程。本实验建立Ameriod环所致小型猪心肌缺血模型，通过冠脉造影评估冠心病缺血程度，并结合NMR埘心肌缺血后血清代谢物变化情况进行分析，进一步寻找冠心病心肌缺血血

5、瘀证可能的代谢标记物。2实验部分2．1材料与方法2．1．1冠心病心肌缺血血瘀证模型的建立与证候判别在本课题组前期实验的基础上建立rAmeriod环所致小型猪心肌缺血模型。术后对动物采集包括舌象在内的四诊信息，并通过冠脉造影、血流变等辅助手段进行评价。根据1986年中国中西医结合学会活血化瘀专业委员会制订的血瘀证诊断标准对模型动物的证候进行判定，确定在4星期时为稳定的冠心病心肌缺血血瘀证模型。2．1．2冠状动脉造影穿刺右侧股动脉，透视下沿钢丝分别送人造影导管至左右冠脉口，行左冠状动脉造影。术后拔除导管及鞘管，穿刺点压迫止血15rain。第2和第4星期

6、进行冠状动脉造影，观察冠脉201o_1if20收稿；201f1223接受本文系国家科技重大专项(No2009ZX09502—018)、圈家自然科学基金(No．30902020)资助Email：doctorwangyong@sina．com276分析化学第39巷5．04．54．0353．02．52．01．51．00．5化学付移Chemicalshift(o3LipidCH【IDIdCHL(VLDLandLDL1．(VLDLandLDI)Lipid-CHCH!L．▲．一——⋯—一L1D1dCH．．一L^——^^，^．一——人＼～～～—～一一—5．55．

7、04．54．03．53．02．52．01．51．OO．500化学移Chemicalshift(o3冈2假手术组与模型组动物血清的HNMR谱图Fig．2AcomparisonofCarr-purcelFmeiboomgill(CPMG)and1ongitudinaleddydelay(LED)spectrafromcontrolandmodelgroupafter4weeksoperationA．假手术组CPMG；B模型组CPMG；C假手术组LED；D模型组LED。ACPMGofcontrolgroupB．CPMGofmodelgroup；C：LED

8、ofcontrolgroup；DLEDofmodelgroup3O／／，1002O／’5010_＼一00—50——10’一