固相萃取-超高效液相色谱-质谱联用技术检测大鼠血浆中T-2毒素及其主要代谢产物.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2012年l2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1852～1858固相萃取一超高效液相色谱一质谱联用技术检测大鼠血浆中T一2毒素及其主要代谢产物赵燕华林妮妮郭磊陈佳刘万卉谢剑炜(军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)(烟台大学药学院，烟台264005)摘要应用固相萃取一超高效液相色谱一三重四极杆一线性离子阱串联质谱技术，建立了高灵敏度的大鼠血浆中单端孢霉烯族(T-2)毒素及其5种主要代谢物的分析方法。在优化的固相萃取条件下，大鼠血

2、浆经HLB固相萃取柱净化富集后，以XDB—C色谱柱(50mmX4．6mm，1．8m)分离，以5mmolfL乙酸铵溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，以玉米赤霉酮为内标，在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。各分析物在0．1～500．0ug／L范围内线性良好(R>0．997)；检出限介于0．02～O-3g／L之间；加标回收率为93．5％～120．3％；相对标准偏差均小于13％。本方法快速、重现性好、灵敏度高，已成功应用于T一2毒素中毒的溯源性研究。关键词单端孢霉烯族毒素；代谢物；固相萃取；液质联用；血浆1引言单端孢霉烯族

3、毒素是自然界存在的最危险的食品污染源之一]。在数十种单端孢霉烯族毒素中，T_2毒素毒性最强，极易污染农作物和储存的粮食。T一2毒素对哺乳动物的半数致死量为3～10mg／kgBWt21。我国规定了配合饲料中T一2毒素的允许量≤1mg／kg[。T_2毒素在许多动物体内代谢较快，30min后即检测不到原型，因此，T-2毒素在体内的毒性作用主要由其代谢产物所引起。一般认为，T_2结构中的环氧基团是其毒性基团，其体内主要代谢产物结构中的环氧环仍然存在，或多或少表现出毒性作用]。T一2毒素进入机体后，主要的代谢方式如图1解所示。OH3羟基T-2毒

4、素OH3一OH．T-2toxin。A。HOAcAcT-2三醇乙酰化T_2毒素珊T-2triolAcetylT-2toxin图解1T一2毒素的主要代谢方式Scheme1MainmetabolicwaysofT-2toxin目前，检测T一2毒素方法有薄层色谱法1、酶联免疫法]、气相色谱法】、气相色谱一质谱联用法[9~11】、液相色谱法”及液相色谱一质谱联用法等，其中，液相色谱一质谱联用法因其灵敏度高、样品无需衍生化处理等优点，近几年被广泛使用。研究T-2毒素在动物体内的代谢途径及其主要代谢物、毒性化合物和残留标志物，将有助于T一2毒素中毒

5、后的溯源性研究。目前，有关生物体液(包括尿液、胆汁和血浆)中的单端孢霉烯族毒素[23,24的测定仅有少数报道，针对T_2毒素及其5种主要代谢产物的同时测定尚未见报道。本研究建立了超高效2012-03—15收稿；2012-05—22接受本文系“十二五”国家科技支撑计划(No．2011BAK10B07)资助项目E—mail：xiejw@bmi．aG．cn第12期赵燕华等：固相萃取一超高效液相色谱一质谱联用技术检测大鼠血浆中T-2毒素及其主要代谢产物1853液相色谱一三重四级杆一线性离子阱质谱同时检测血浆中T一2毒素及其主要代谢产物的方法。

6、方法简单快速，回收率高，准确可靠，对2毒素中毒的溯源性检测具有重要意义。2实验部分2．1仪器与试剂ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；Q—Trap5500型三重四极杆线性离子阱串联质谱仪(美国ABSciex公司)；ACQUITYUPLCBEHCl8柱(5OmmS<2．1mmID，1．7um，美国Waters公司)；XDB—C18反相色谱柱(50mm×4．6mmX1．8pm；100mm×3．0mm×1．8m，美国Agilent公司)；真空固相萃取装置(美国Supelco公司)；OasisHLB固相萃取柱(30mg，

7、lmL；60mg，3mL，美国Waters公司)；RVC2-33CDplus型冷阱一隔膜泵一离心蒸发浓缩仪(德国Christ公司)；HW．SY1卜K2型电热恒温水浴锅(北京长风仪器公司)。甲醇、乙腈(色谱纯，美国SigmaAldrich公司)；乙酸铵(美国Fisher公司)；玉米赤霉酮(Zearalanone，ZAN)、新茄病镰刀菌烯醇(Neosolaniol，NEO)，3'-羟基一T一2毒素(3一OH-T一2toxin，3r_OH-T一2)，T_2三醇(T-2triol，TRIOL)，HT一2毒素(HT-2toxin，HT一2)，T

8、一2毒素(T一2toxin，T一2)及乙酰化T_2毒素(AcetylT-2toxin，AceT一2)各参考品均购于美国SigmaAldrich公司；清洁级SD(SpragueDawley)大鼠(雌雄各半，体重约250g)