MicroRNA调控原始卵泡形成的研究.pdf

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1、中国科学技术大学博士学位论又MicroRNA调控原始卵泡形成的研究作者姓名：学科专业：导师姓名：完成时间：许波遗传学史庆华教授二。一二年二月十五日mlrrllllllllllldlMI＼2125895UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationfordoctor，SdegreeThefuctionaI)leofmiroRNAnctiOnarocroRNA_InIregulationofPrimordialfollicleassemblyAuthor’sName：speciality：n‘3UDeIVlSOr：

2、1⋯'1FlnlSneCItlme：BoXuGeneticsProf．QinghuaShiFeb15m，2012中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：j在礁／签字日期：2皇12：￡：三1中国科学技术大学学位论文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构

3、送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。作者签名：签字日期：在解密后也遵守此规定。(年)遗篷二丝廑：至!三】导师签签字日摘要MicroRNA(miRNA)是一类长度约为21个核苷酸，主要在转录后水平调节基因表达的非编码RNA。在多种植物和动物中，miRNA已被报道可调控个体发育、肿瘤发生、应激反应等多种重要的生物学过程。在小鼠中，敲除负责miRNA成熟的关键基因Dicerl可导致卵巢、子宫等生殖器官发育异常和不育。但究竟哪

4、些miRNA以及它们如何调控生殖器官的发育，尤其是原始卵泡形成，则尚无报道。为确定哪些miRNA参与原始卵泡形成的调控，我们利用miRNAmicroarray检测在原始卵泡形成前及形成时的小鼠卵巢中差异表达的miRNA，发现18条在原始卵泡形成过程中差异表达的miRNA。利用胎鼠卵巢体外培养结合脂质体转染等方法，我们建立了卵泡形成基因／miRNA功能筛选系统。通过miRNAmimics或inhibitors分别转染培养的胎鼠卵巢，我们对这18条miRNA在卵巢中进行超表达和功能抑制实验，发现其中5条miRNAmimics和6条inhibitors可显著影响原始卵泡的形

5、成。为迸一步了解这些miRNA如何调控原始卵泡的形成，我们丌发了生殖系统专用的miRNA靶基因预测软件(SMESE)，并用于对上述功能miRNA的靶基因进行了预测，且通过实时定量PCR和荧光素酶报告系统对预测结果进行了验证。发现这些功能miRNA通过多种途径调节原始卵泡的形成，如miR一153通过抑制Caspase-2mRNA的翻译来减少卵母细胞的凋亡，从而促进原始卵泡的形成；miR一200a*通过抑制Cdh一2的mRNA和蛋白的表达调控卵巢细胞之间的粘附与通讯，进而抑制原始卵泡的形成。我们发现，miR一200a*不但调控Cdh-2的表达，其自身也受到雌激素的调控。利

6、用条件性敲除小鼠模型，我们对卵巢体细胞和卵母细胞中的Cdh一2的功能进行了研究，结果发现卵巢体细胞缺失Cdh一2之后会抑制原始卯泡形成，而Cdh-2在卵母细胞中的缺失并没有影响原始卵泡的形成，表明雌激素通过卵巢体细胞中miR-200a*与其靶基因Cdh一2来抑制原始卵泡形成。我们的研究结果，不仅第一次系统地证明了miRNA可参与卵泡形成，也为卵泡形成的分子调控机制增添了新内容。关键词：MicroRNA原始卵泡形成功能筛选SMESEmiR．200a*．Cdh．2原书空白页不缺内容AbstractmiRNA(miRNA)areshort，endogenous，non—co

7、dingRNAs(~21nucleotides)thathavebeenidentifiedinavarietyoforganismsfromplantstomammals．Theypost-transcriptionallyregulategeneexpressioninanumberofprocesses，includingdevelopment，cancer,andstressresponses．Theprimordialfolliclepoolcontrolsthelifespanofreproductivelifeoffemalemamma