培养基的常规配制程序.doc

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1、培养基的常规配制程序一、H的要求了解培养基的配制原理。了解培养基常规配制程序。了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。二、基本原理正确掌握培养基基的配制方法是从事微牛物学实验工作的重要基础，由丁-微牛物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微牛物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差界。但…般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。三、实验材科（一）药晶待配各种培养的组成成分，琼脂,lmol/LNaOH溶液,lmol/1（升

2、，统一用大写）HC1溶液。（二）仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。（三）玻璃器皿移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。（四）其他物品药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。四、实验内容（一）玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水屮，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸镭水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸倔水冲洗，洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱屮烘干后备用。培养基的常规配制程序一、H的要求了解培养基的配制原

3、理。了解培养基常规配制程序。了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。二、基本原理正确掌握培养基基的配制方法是从事微牛物学实验工作的重要基础，由丁-微牛物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微牛物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差界。但…般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。三、实验材科（一）药晶待配各种培养的组成成分，琼脂,lmol/LNaOH溶液,lmol/1（升，统一用大写）HC1溶液。（二）仪器天平或台秤，高

4、压蒸汽灭菌锅。（三）玻璃器皿移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。（四）其他物品药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。四、实验内容（一）玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水屮，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸镭水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸倔水冲洗，洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱屮烘干后备用。1.灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包装培养皿由一•盖一底组成一•套。可用报纸将几套培养皿包成一包

5、，或者将几套培养皿直接置丁•特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。(2)移液管的包装在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)。它的作用是避免外界及口屮杂菌吹入管内，并防止菌液等吸入口屮。寒入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。棉花自身长度约1-1・5cm。塞棉花时，可用一•外圈拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45度角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管

6、丿玉紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌(见图5—1—1)。SsII«»»«««(-)液体及I古I体培养基的配制过程1.液体培养基配制(1)称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药站。先按培养基配方计算各成分的用虽:，然后进行准确称量。(2)溶化将称好的药品置于一烧杯屮，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸镭水)，用玻棒搅动，加热溶解。(1)定容待全部药品溶解后，倒入一量筒屮，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基小。(2)调

7、pH一般用pH试纸测定培养基的pHo用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用银子夹取此段pH试纸，在培养基屮蘸一下，观看其pll范围，如培养基偏酸或偏碱吋，可用lmol/1NaOH或lmol/1HC1溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入*0H或HC1溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基屮成分。边加边搅拌,并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。(3)过滤用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求吋，此步可省去。2•同体培养基的配制配制固体培养慕时，应将已配好的液体培养基加热点沸，再将称好的琼脂(1.5%-2%)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底

8、烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。(三)培养基的分装根据不同需要，可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养