小球藻活性成分的逆流色谱分离方法研究.pdf

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1、DissertationSubmittedtoZlhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringSEPARATIONACTIVECONSTITU吧NTSFROM(：：6纪纱尼己ZZ。4夕ZZ区以2乃：rBYCOI心nER．CURRENTCHROMATOGRAPHYAuthor：XianjiangLinMajor：FoodScienceandEngineeringSupervisor：ProfessorsHongZhangandYanbinLuDec．2013

2、CollegeofFoodScienceandBiotechnology,ZhejiangGongshangUniversityHangzhou，310035,P．R．China浙江工商大学硕士论文MYill2115IIIl3I111IIIIIllllll69Ⅷ6IY2531小球藻活性成分的逆流色谱分离方法研究摘要小球藻(Chlorellavu／garis)是一类单细胞淡水绿藻，含有丰富的营养物质和活性成分。各种临床研究表明小球藻具有显著的抗肿瘤、抗氧化、抗菌以及抗炎症等活性，对人体健康非常有益。逆流色谱(CCC)是一种不

3、用固相载体的液．液分配色谱技术，具有分离量大、分离环境温和、回收率高、溶剂消耗少等优点，在天然生物活性物质的分离纯化中具有独特的优势。本论文采用逆流色谱技术，针对小球藻中的低极性化学组分如类胡萝b素、植物甾醇等建立了几种新型分离制备方法，主要研究内容和结果如下：1、采用正己烷．乙醇(1：1，v／V)溶剂体系超声提取小球藻中的低极性组分，并通过皂化处理去除叶绿素及脂肪酸等杂质，获得小球藻皂化提取物。本实验分别针对其中主要成分，如类胡萝t-素和植物甾醇等物质建立了超高效液相色谱分析方法。2、建立了小球藻中叶黄素的逆流色谱分离方

4、法。采用正己烷．乙醇．水(4：3：1，v／v)溶剂体系，成功从100mg小球藻皂化提取物中一步制备分离30．7mg叶黄素，纯度达94．1％。实验对比研究了逆流色谱与半制备型高效液相色谱，结果表明逆流色谱具有分离量大、产率高、溶剂消耗少等优点，是一种高效、经济的制备型分离方法，非常适合食品中活性物质的分离提取。浙江工商大学硕士论文3、设计开发了绿色、环保、纯天然的柠檬烯．乙醇．水体系作为逆流色谱溶剂体系，建立了小球藻中叶黄素的新型绿色逆流色谱分离方法。实验通过研究柠檬烯、正己烷等溶剂的理化性质和柠檬烯．乙醇．水溶剂体系的三元

5、相图，得出柠檬烯可以代替正己烷作为逆流色谱溶剂体系；采用柠檬烯一乙醇一水(10：9：l，v／V)溶剂体系，成功从300mg小球藻超声提取物中一步制备分离得到20．4mg叶黄素，纯度达94．6％。实验结果表明本实验所建立的逆流色谱分离方法更绿色、环保。4、建立了小球藻中植物甾醇的闭合循环逆流色谱分离方法。实验采用正己烷．二氯甲烷．乙腈(10：3：7，v／V)溶剂体系，从300mg小球藻皂化提取物中制备分离得到40mg植物甾醇混合物；应用闭合循环逆流色谱，采用正己烷．二氯甲烷．乙腈(10：3：7，v／v)溶剂体系，成功从40m

6、g植物甾醇混合物中制备分离得到24．3mg麦角固醇和13．7mg麦角固醇结构类似物，纯度分别达97．2％和96．4％。实验结果表明闭合循环逆流色谱能显著提高色谱分离度，非常适合分离小球藻中结构及性质均相似的植物甾醇类化合物。关键词：小球藻；逆流色谱；叶黄素；植物甾醇；柠檬烯；绿色溶剂Ⅱ浙江工商大学硕士论文SEPARAnONACⅡVECONSnTUENTSFROM伽勿尼易￡己彳多ZZG爱宠召BYCOUNTER．CI瓜RENTABSTRACTChlorellavulgaris,aunicellulargreenalgagrow

7、ninfreshwater,containsredundantnutrientsubstanceandmicroelement．Numerousclinicalstudieshaveshownthatchlorellaingestioncanbenefitforhealth，duetoitsprotectiveroleonbacteria，antiproliferativeeffectsoncancercells，andanti-inflammatoryandantioxidantactivity．Counter—curr

8、entchromatography(CCC)isasupport-freeliquid—liquidpartitionchromatography，ithasnumerousadvantagesoflargesampleload，moderateoperationcondition，highsample