牛奶中部分成分测定.doc

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1、牛奶中部分成分的分析摘要：牛奶营养成分很高，富含蛋白质和微量元素钙、铁、锌等，是人们生活中的主要要营养食品之一。因此，分析牛奶中的营养成分含量是很有必要的工作。本实验在普通实验室条件，采用简单科学快捷的方法分析某品牌牛奶中部分成分含量。关键字：牛奶蛋白质钙铁锌1、实验目的用分光光度法测某牛奶中蛋白质、钙、铁、锌的含量。2、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。双缩脲

2、(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙

3、可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH≈12～13，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡

4、量光被吸收程度的一个物理量。　　吸光度用A表示。　　A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm，c为溶液浓度，单位g/L　　影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。　　符号A，表示物质对光的吸收程度。邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量Fe2+的高灵敏度显色剂在pH2～9的条件下，Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm波长处有最大吸收。该配合物的lgk稳＝21.3（20℃），摩尔吸光系数510=1.1×104L·mol-1·cm-1。在显色前，首

5、先用盐酸羟胺把Fe3+离子还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl＝2Fe2++4H++2Cl-+N2↑+2H2O测定时，控制溶液的酸度在pH＝5左右较为适宜。酸度高时，反应进行较慢；酸度太低，则Fe2+离子水解，影响显色。当铁浓度在5.0mg／mL以内时，吸光度与Fe2+浓度呈直线关系。Bi3+、Cd3+、Hg9+、Ag+、Zn2+等离子在pH＝2~9时与邻二氮菲生成沉淀。Co2+，Ni2+，Cu2+等离子可与邻二氮菲形成有色配合物，故应注意它们的干扰。锌是人体中必需的微量元素之一，锌缺乏会阻碍生长发育，过量又会导致胃癌等疾病。人

6、类从牛奶等饮食中可以获得一定量的锌。在pH4.0～5.5的水溶液中，锌离子与双硫腙（C13H12N4S）生成红色螯合物，摩尔吸光系数535=9.3×104L·mol-1·cm-1用四氯化碳萃取后比色定量。在选定的pH条件下，用足够量的硫代硫酸钠可掩蔽水中存在的少量铅、铜、镉、钴、铋、镍、金、钯、银、亚锡等干扰金属离子。3、实验步骤3.1、试剂的配制3.11、pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液的配制:先配A液与B液。A液：0.2mol/L醋酸钠溶液。B液：0.2mol/L醋酸溶液。取醋酸钠固体6.5461g加水溶解并稀释至100ml，取冰醋酸5mL加水稀释至10

7、0ml，混合即得pH4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液200mL。3.12、乙醇—乙醚混合液的配制：取25ml95％乙醇与25ml无水乙醚混合3.13、双缩脲试剂：称取CuS04·5H2O0.3g，酒石酸钾0.9g和碘化钾0.5g，分别溶解后混匀，加6mol·L-1NaOH10mL，最后加水至100mL，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。3.14、蛋白质标准液(10mg·mL-1)，用小烧杯称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入l0mL容量瓶中，淋洗小烧杯数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线。待测蛋白样本：将牛奶样品用生理盐水准确

8、配制成一定浓度的溶液后再测定；将制得的酪蛋白用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后