叶绿素的提取和柱色谱的分离.doc

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1、叶绿素的提取和柱色谱的分离一．实验目的学习从植物中提取色素的方法叶绿素的去镁离子操作二．实验原理植物绿叶中含有多种天然色素，最常见的是胡萝卜素（橙色），叶绿素（绿色）和叶黄素（黄色）叶绿素存在两种想似的形式即叶绿素a（C55H72O5N4Mg）和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两者差别只是a中一个甲基被b中的甲酰基取代。它们都是吡咯衍生物和金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚，石油醚等一些非极性的溶剂。三．主要仪器和试剂仪器：研钵、树脂管、锥形瓶，烧杯

2、、量筒、玻璃棒、分析天平、铁架台、洗耳球、分液漏斗、移液管。试剂：硅胶、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、正丁烷、正丁醇、乙醇。四、实验步骤1.菠菜叶绿素的提取将菠菜洗净，甩去叶面上的水珠。称取10克用剪刀剪碎，置于研钵中捣烂。加30ml2:1石油醚-乙醇溶液，分几次浸提、抽滤。滤液转入分液漏斗，每次用15ml水洗涤两次。弃去水-醇层，将石油醚层用无水硫酸钠干燥2.柱色谱分离（1）湿法装柱将树脂管竖直固定在铁架台上，关闭活塞，加入石油醚至柱容积1/4处，将需要量的硅胶置于烧杯中，加入石油醚浸润，溶胀并调成浆糊状。打开柱下活塞，调节流速为每

3、秒钟一滴，将调好的硅胶在搅拌下自柱顶缓缓注入柱中，同时用硬橡胶棒轻轻敲击柱身，使硅胶在石油醚中均匀沉降，形成均匀紧密的吸附剂柱。吸附剂加至2/3柱身后，待柱面液体水平，关闭活塞。（2）湿法加样将待分离的提取液用玻璃棒引流沿着内壁缓缓加入，切记不要冲动吸附剂。溶液加完后，小心开启柱下活塞，待提取液渗入硅胶层中分层，关闭活塞。用少许石油醚冲洗柱内壁，再放出液体至液面降至硅胶层。（3）淋洗和接收【1】首先用50ml9:1的石油醚-丙酮溶液洗脱，当第一个橙黄色带即将流出来时，换接收瓶。——胡萝卜素。【2】换50ml7:3石油醚-丙酮洗脱

4、,当第二个棕黄色带流出时,换接收瓶。——类胡萝卜素【3】换30ml3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脱，接收叶绿素五。注意事项1.淋洗剂流出速度不宜过快2.适当选择吸附剂和淋洗剂3.柱身需安装垂直4.避免断层和裂缝，以及沟流现象。