氯化钙对小麦在盐胁迫培养下的缓解作用.doc

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1、植物生理学实验技能测试（设计性实验）姓名：学号：班级：2010级农资班实验时间：2012.662012氯化钙对小麦在盐胁迫培养下的缓解作用一、实验目的：1、研究盐分胁迫对小麦生理发育的影响。2、外源钙盐对胁迫条件下小麦种子的缓解作用及其机理。3、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素的方法及计算二、实验原理：1、盐胁迫条件下，小麦的生理发育收至怀同程度的抑制，应用夕卜源物质来减轻盐害。本实验选用外源氯化钙来进行缓解，通过测量无胁迫、缓解前和缓解后小麦叶中的叶绿素含量进行比较。当植物受到逆境胁迫时，能通过提高细胞质的游离钙离子的浓度，并通过Ca2+与

2、钙调素结合启动一系列生理生化过程，在作物对逆境胁迫的感受、传递、响应和适应过程中发挥重要作用。2、在663nm、645nm、470nm(分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红光区的吸收峰)的光吸收，然后根据Lambert.Beer定律，计算出提取液中叶绿素a、叶绿素b、和类胡萝卜素的浓度。Ca=12.21A663-2.81A645(1)Cl^20.13A645-5.03A663(2)CT=Ca+Ou8.05A663+20・29A645(3)Cx.c=(1000D4703・27Ca-104Cb)/229(4)Ca—白(mg/L)Cb—(mg/L)的总(m^L)Cx.c-

3、^iW*卜^^(mg/L)82.04和9.27—啪录素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数16.75和45.60—Hi绿素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数三、实验材料与用具：1、材料：无胁迫、缓解前和缓解后的小麦叶片，2、试剂：10%的氯化钠溶液，10%氯化钙溶液，分光光度计，离心机，试管若干，滤纸若干，培养皿，80%丙酮或96%乙醇；石英砂，CaCO33、仪器：%1.实验步骤:1、挑选大小一致、饱满的小麦籽粒，置于铺有一层纱布的培养皿内并加入蒸懈水进行培养，一个实验组和一个对照组。2、等小麦长出叶子且叶子长度大约为2—3cm时，在一、二号培养皿中加入10%的氯

4、化钠溶液，在三号培养皿中加入蒸f留水，继续培养三天，并观察小麦的生长发育状况。3、三天后，在一号培养皿中加入10%氯化钙，二、三号培养皿中加入蒸懾水，继续培养三天并观察小麦的生长发育状况。4、提取叶绿索在一、二、三号培养皿中选取有代表性的小麦叶片，各称取0.2g剪碎后置于研体屮，加入5凶80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。充分研磨(组织变白)，再加10ml80%W酮，静止3・5分钟，冲洗研休后转至离心管，定容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80%丙酮定容至25mlo5、测定OD值:取上清液1ml,加80%丙酮4ml,以80%丙酮作空白对照，用分光光度计分别测

5、定叶绿素提取液在645nm>663nm>470nm下的吸光度。6、计算：把测岀的吸光值带入(1)(2"3)(4)式计算叶绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。根据下式求出植物组织中叶绿索的含量：叶绿素的含虽(mg/g)=cXvXn/mC—叶绿素的浓度(mg/L)；v—提取液体积(ml)；n一稀释倍数；m—样品鲜重(g)五、实验思考题：1、盐胁迫下钙离子对小麦生长发育有何影响？2、盐处理対小麦生长发育的影响有哪些？